| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 背景概述 | 第12-14页 |
| ·家禽就巢行为的调控机理 | 第12-13页 |
| ·下丘脑-垂体-性腺轴的调控机理 | 第13-14页 |
| 2 GnRHR 基因的研究概述 | 第14-18页 |
| ·G 蛋白偶联受体的简介 | 第14-15页 |
| ·GnRH 结构特点 | 第15页 |
| ·GnRHR 种类和结构特点 | 第15-16页 |
| ·GnRHR 介导的细胞转导机制 | 第16页 |
| ·GnRHR 基因的表达调控 | 第16-17页 |
| ·GnRHR 生物学意义 | 第17-18页 |
| ·GnRHR 对于神经调节的作用 | 第17页 |
| ·GnRHR 对于机体组织的作用 | 第17页 |
| ·GnRHR 基因与畜禽繁殖性能的关系 | 第17-18页 |
| 3 cDNA 末端快速克隆技术研究概述 | 第18-20页 |
| ·RACE 技术的基本原理 | 第18-20页 |
| ·RACE 的应用及其前景 | 第20页 |
| 4 实时荧光定量 PCR 技术研究概述 | 第20-21页 |
| 5 DNA 标记技术研究概述 | 第21-22页 |
| 6 本研究的目的、创新点与意义 | 第22-24页 |
| 第二章 番鸭 GnRHR 基因全长 cDNA 的克隆和生物信息学分析 | 第24-42页 |
| 1 材料和方法 | 第24-30页 |
| ·试验动物 | 第24页 |
| ·试剂和仪器 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·引物设计与合成 | 第24-25页 |
| ·全长 cDNA 序列获取方法 | 第25-30页 |
| ·番鸭垂体总 RNA 的获得 | 第25页 |
| ·部分 cDNA 序列获得 | 第25-27页 |
| ·3’-RACE | 第27-28页 |
| ·5’-RACE | 第28-30页 |
| ·RACE 序列验证 | 第30页 |
| ·序列生物信息学分析 | 第30页 |
| 2 结果和分析 | 第30-40页 |
| ·垂体 Total RNA 的纯度检测结果 | 第30-31页 |
| ·番鸭 GnRHR 基因部分 cDNA 序列获得结果 | 第31-32页 |
| ·PCR 反应液检测结果 | 第31页 |
| ·番鸭 GnRHR 基因部分 cDNA 序列分析 | 第31-32页 |
| ·GnRHR 基因全长 cDNA 序列结果 | 第32-34页 |
| ·3’-RACE 和 5’-RACE 的电泳检测和测序结果 | 第32-33页 |
| ·番鸭 GnRHR 基因全长 cDNA 序列的获得 | 第33-34页 |
| ·RACE 序列验证 | 第34页 |
| ·GnRHR 基因序列同源性分析 | 第34-37页 |
| ·编码蛋白的基本理化性质分析 | 第37-38页 |
| ·编码蛋白结构分析 | 第38-40页 |
| 3 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 番鸭 GnRHR 和 GnRH 基因的时空表达研究 | 第42-56页 |
| 1 材料与方法 | 第42-45页 |
| ·试验动物和器官组织选择 | 第42页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·引物设计及合成 | 第42-43页 |
| ·总 RNA 的提取与反转录 | 第43-44页 |
| ·组织总 RNA 的提取和检测方法同试验一 | 第43页 |
| ·cDNA 的合成 | 第43-44页 |
| ·Real-time PCR 反应的优化 | 第44页 |
| ·扩增产物特异性检测 | 第44页 |
| ·Real-time PCR 应条件的优化 | 第44页 |
| ·标准曲线的建立 | 第44-45页 |
| ·样品的检测 | 第45页 |
| ·数据的处理及分析 | 第45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-53页 |
| ·番鸭组织总 RNA 的完整性和纯度检测 | 第45-46页 |
| ·扩增产物特异性结果 | 第46页 |
| ·Real-time PCR 的标准曲线结果 | 第46-48页 |
| ·Real-time PCR 的熔解曲线及扩增曲线结果 | 第48-50页 |
| ·Real-time PCR 检测结果 | 第50-53页 |
| ·GnRHR 基因在番鸭不同生长阶段不同组织表达水平 | 第50-51页 |
| ·GnRH 基因在 HPG 轴组织上不同时期的表达水平 | 第51-53页 |
| 3 讨论与分析 | 第53-56页 |
| ·Real-time PCR 检测方法的建立 | 第53-54页 |
| ·GnRHR 基因表达部位及影响 | 第54-55页 |
| ·GnRH 及受体基因的表达特征及对就巢行为的影响 | 第55-56页 |
| 第四章 番鸭 GnRHR 基因多态性及其与产蛋性状关联分析 | 第56-66页 |
| 1 材料 | 第56页 |
| ·试验对象 | 第56页 |
| ·仪器与试剂 | 第56页 |
| ·主要仪器设备 | 第56页 |
| ·主要试剂及配置 | 第56页 |
| ·分析软件和工具 | 第56页 |
| 2 试验方法 | 第56-61页 |
| ·基因组 DNA 提取 | 第56-57页 |
| ·DNA 纯度和浓度检测 | 第57-58页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第57-58页 |
| ·紫外分光光度计检测 | 第58页 |
| ·GnRHR 基因的 PCR 扩增 | 第58-59页 |
| ·PCR 引物设计 | 第58页 |
| ·PCR 反应条件 | 第58-59页 |
| ·PCR 产物的琼脂糖电泳检测和测序分析 | 第59页 |
| ·单核苷酸多态性检测 | 第59-60页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行 SSCP 分析 | 第59-60页 |
| ·硝酸银染色法洗胶 | 第60页 |
| ·基因型的判定和测序 | 第60页 |
| ·多态性检测 | 第60页 |
| ·限制性内切酶片段长度多态性检测 | 第60页 |
| ·PCR-SSCP 检测 | 第60页 |
| ·数据处理及分析 | 第60-61页 |
| ·基因频率和基因型频率 | 第60-61页 |
| ·基因多态性与番鸭产蛋性能的关联分析 | 第61页 |
| 3 结果 | 第61-64页 |
| ·番鸭基因组 DNA 的提取效果 | 第61页 |
| ·番鸭 GnRHR 基因 DNA 序列的获取 | 第61-62页 |
| ·番鸭 GnRHR 基因的单核苷酸多态位点（SNPs）检测 | 第62-63页 |
| ·番鸭 GnRHR 基因多态性检测 | 第63页 |
| ·番鸭 GnRHR 基因的群体遗传学分析 | 第63-64页 |
| 4 分析与讨论 | 第64-66页 |
| ·GnRHR 基因内含子和多态性 | 第64页 |
| ·GnRHR 基因对产蛋性能的影响 | 第64-66页 |
| 全文结论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 附录 | 第78-81页 |
