| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| ·玉米粗缩病的危害 | 第11页 |
| ·玉米粗缩病的研究现状 | 第11-14页 |
| ·玉米粗缩病的病原及病毒的形态结构 | 第11-12页 |
| ·玉米粗缩病毒的寄主 | 第12页 |
| ·玉米粗缩病毒的传播 | 第12页 |
| ·玉米粗缩病的主要症状 | 第12页 |
| ·玉米抗粗缩病种质资源鉴定 | 第12-13页 |
| ·玉米粗缩病的抗性遗传研究 | 第13-14页 |
| ·植物病毒病的抗病策略 | 第14-17页 |
| ·利用病毒外壳蛋白介导的抗性 | 第14-15页 |
| ·利用复制酶介导的抗性 | 第15页 |
| ·利用运动蛋白介导的抗性 | 第15页 |
| ·利用RNA 干扰介导的抗性 | 第15-17页 |
| ·RNA 干扰在抗病毒基因工程中的优势 | 第17页 |
| ·玉米遗传转化的研究进展 | 第17-21页 |
| ·玉米遗传转化的受体材料 | 第17-18页 |
| ·玉米遗传转化的选择标记 | 第18页 |
| ·玉米遗传转化启动子的选择 | 第18-19页 |
| ·玉米遗传转化方法的研究 | 第19-21页 |
| 引言 | 第21-22页 |
| 第二章 RNA 干扰抗粗缩病载体的构建 | 第22-41页 |
| 1 材料与方法 | 第22-35页 |
| ·试验材料 | 第22页 |
| ·生化试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·试验方法 | 第22-35页 |
| ·RNA 干扰目的基因的选择与克隆 | 第23页 |
| ·标记基因Bar 的获得与改造 | 第23-27页 |
| ·过渡表达载体PNCXB 的构建 | 第27-28页 |
| ·loop 环和NOS 终止子的获得 | 第28-29页 |
| ·CaMV35S 启动子的获得 | 第29-30页 |
| ·正向目的片段插入 | 第30页 |
| ·反向片段的插入 | 第30-31页 |
| ·表达载体PNCXB-848 的构建 | 第31-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-39页 |
| ·目的基因的选择与克隆 | 第35页 |
| ·标记基因Bar 的获得与改造 | 第35-36页 |
| ·过渡表达表达载体PNCXB 的构建 | 第36-37页 |
| ·loop 环和NOS 终止子的获得 | 第37页 |
| ·CaMV35S启动子的获得 | 第37页 |
| ·正向目的片段的插入结果 | 第37-38页 |
| ·反向目的片段的插入结果 | 第38页 |
| ·表达载体PNCXB-848 的构建 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| ·RNA 干扰片段的选择与获得 | 第39页 |
| ·RAN 干扰结构对沉默效率的影响 | 第39-40页 |
| ·标记基因的选择 | 第40页 |
| ·标记基因的删除 | 第40-41页 |
| 第三章 RNA 干扰基因的农杆菌介导转化 | 第41-59页 |
| 1 材料与方法 | 第41-43页 |
| ·试验材料 | 第41页 |
| ·菌株 | 第41页 |
| ·生化试剂 | 第41-42页 |
| ·仪器 | 第42页 |
| ·培养基和试剂的配制 | 第42-43页 |
| 2 试验方法 | 第43-47页 |
| ·干扰基因的农杆菌电击转化 | 第43-44页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第43页 |
| ·重组质粒PNCXB-848 的电击转化 | 第43页 |
| ·阳性菌株的 PCR 验证及保存 | 第43-44页 |
| ·干扰基因的农杆菌介导转化 | 第44-45页 |
| ·幼胚准备 | 第44页 |
| ·农杆菌准备 | 第44页 |
| ·农杆菌侵染幼胚 | 第44页 |
| ·幼胚和农杆菌的共培养 | 第44页 |
| ·静息培养 | 第44页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选 | 第44页 |
| ·植株的再生 | 第44-45页 |
| ·再生植株的环境适应 | 第45页 |
| ·再生植株的管理 | 第45页 |
| ·转基因植株T1 代的除草剂表型抗性筛选 | 第45页 |
| ·除草剂喷洒浓度的确定 | 第45页 |
| ·T1 代植株的除草剂筛选 | 第45页 |
| ·T1 代植株植株的PCR 鉴定 | 第45-46页 |
| ·DNA 的提取 | 第45-46页 |
| ·标记基因的PCR 检测 | 第46页 |
| ·目的基因的PCR 检测 | 第46页 |
| ·转基因植株T2 代的除草剂筛选和PCR 鉴定 | 第46页 |
| ·转基因植株T2 代的抗病性鉴定 | 第46-47页 |
| ·田间试验设计 | 第46-47页 |
| ·鉴定方法 | 第47页 |
| ·玉米粗缩病的严重度分级 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-56页 |
| ·干扰基因的农杆菌电击转化结果 | 第47页 |
| ·干扰基因的农杆菌介导转化结果 | 第47-50页 |
| ·愈伤组织的诱导及抗性筛选结果 | 第47-48页 |
| ·抗性愈伤组织的分化成苗 | 第48-49页 |
| ·再生植株的大田生长结实 | 第49-50页 |
| ·T1 代转基因植株的表型抗性筛选结果 | 第50-51页 |
| ·除草剂喷洒浓度的确定 | 第50页 |
| ·T1 代植株的除草剂表型抗性筛选结果 | 第50-51页 |
| ·T1 代植株标记基因的PCR 检测结果 | 第51页 |
| ·T1 代植株目的基因的PCR 检测结果 | 第51页 |
| ·T2 代转基因植株的除草剂抗性筛选和PCR 鉴定结果 | 第51-54页 |
| ·T2 代植株的除草剂抗性筛选结果 | 第51-53页 |
| ·T2 代植株的PCR 鉴定结果 | 第53-54页 |
| ·T2 代转基因穗行的抗病性鉴定结果 | 第54-56页 |
| ·感病材料Mo17 和抗病材料沈137 的发病状况 | 第54-55页 |
| ·T2 代转基因穗行的抗病性鉴定结果 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| ·农杆菌介导的影响因素分析 | 第56-57页 |
| ·转基因植株的除草剂筛选浓度分析 | 第57页 |
| ·转基因植株大田生长状况分析 | 第57页 |
| ·转基因植株阳性概率分析 | 第57-58页 |
| ·转基因植株的抗病性分析 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| ABSTRACT | 第66-67页 |