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玉米光周期敏感基因ZmELF4的克隆及功能验证

致谢第1-9页
摘要第9-11页
第一章 文献综述第11-30页
 1. 植物的光周期现象及其分子机制的研究进展第11-19页
   ·光周期及光周期敏感现象第11页
   ·光周期中光期和暗期的作用第11-12页
   ·拟南芥光周期作用分子机制的研究进展第12-18页
     ·光受体第12-14页
     ·生物钟组分第14-16页
     ·下游的转录调控因子第16页
     ·成花信号综合子第16-17页
     ·抑制因子第17-18页
   ·水稻光周期作用分子机制的研究进展第18-19页
 2. 玉米光周期敏感现象的研究进展第19-22页
   ·玉米光周期敏感现象第19页
   ·玉米光周期敏感指标及特性第19-20页
   ·玉米光周期敏感时期的研究第20页
   ·玉米光周期敏感相关基因的定位研究第20-21页
   ·玉米光周期敏感相关基因的克隆与研究第21-22页
 3. 拟南芥ELF4 基因及其在其它物种中同源基因的研究进展第22-23页
   ·拟南芥ELF4 基因的研究进展第22-23页
   ·ELF4-like 基因在其它物种中同源基因的研究进展第23页
 4. 同源序列克隆法第23-25页
   ·基因同源序列克隆法的原理第23-24页
   ·同源序列克隆法的优点及存在的问题第24-25页
 5. 实时荧光定量PCR 技术第25-26页
   ·实时荧光定量 PCR 技术原理第25-26页
   ·实时荧光定量 PCR 技术的优点第26页
 6. 亚细胞定位技术第26-28页
   ·免疫荧光技术第27页
   ·免疫胶体金标记第27页
   ·融合报告基因定位法第27-28页
 7. 拟南芥转基因方法的研究第28-30页
第二章 玉米光周期敏感基因ZmELF4 的克隆第30-44页
 1. 材料与方法第30-35页
   ·实验材料第30-31页
   ·试剂与仪器第31页
   ·方法第31-35页
     ·总 RNA 的提取与纯化第31-32页
     ·DNA 的提取与纯化第32-33页
     ·cDNA 第一链的合成第33-34页
     ·玉米ZmELF4 基因片段的克隆第34-35页
       ·玉米ZmELF4 基因的PCR 扩增第34页
       ·玉米ZmELF4 基因PCR 扩增产物的回收、连接与转化第34-35页
     ·测序结果分析第35页
 2. 结果与分析第35-42页
   ·RNA 提取、纯化、第一链合成及检测第35-36页
   ·玉米ZmELF4 基因的克隆与分析第36-42页
     ·玉米ZmELF4 基因的克隆第36页
     ·玉米ZmELF4 基因序列分析第36-42页
       ·CML288 和黄早4 中ZmELF4 基因cDNA、DNA 和氨基酸序列的比较分析第36-38页
       ·ZmELF4 基因的序列分析第38-40页
       ·玉米ZmELF4 基因的氨基酸序列分析第40-41页
       ·玉米 ZmELF4 基因的两种转录方式第41-42页
 3. 讨论第42-44页
   ·玉米ZmELF4 基因是ELF4/OsELF4 基因的同源基因第42-43页
   ·玉米ZmELF4 基因下一步亟待需要探讨的问题第43-44页
第三章 玉米ZmELF4 基因及其相关基因的表达分析第44-55页
 1. 材料与方法第44-46页
   ·供试材料第44-45页
   ·光周期处理与取样第45页
   ·试剂与仪器第45页
   ·方法第45-46页
     ·总 RNA 的提取与纯化第45页
     ·cDNA 第一链的合成第45页
     ·荧光定量 PCR 引物的设计第45-46页
     ·标准品的制备和标准曲线的建立第46页
     ·样品检测与数据处理第46页
 2. 结果与分析第46-52页
   ·基因标准曲线的建立第46-47页
   ·基因表达模式的研究第47-52页
     ·ZmELF4 基因的节律表达模式第47-49页
     ·ZmELF4 基因不同生长发育阶段在叶片与茎尖中的表达规律第49-50页
     ·ZmELF4 基因在玉米不同组织部位的表达第50页
     ·ZmELF4 基因与ZmCCA1 基因的表达关系第50-51页
     ·ZmELF4 基因与ZmCOL 基因之间的表达关系第51-52页
 3. 讨论第52-55页
   ·ZmELF4 基因周期表达模式及与ZmCCA1 基因之间的表达关系的探讨第52-53页
   ·ZmELF4 与ZmCOL 相互作用共同调控玉米光周期诱导开花的过程第53页
   ·玉米ZmELF4 基因在表达水平上需要进一步探讨的问题第53-55页
第四章 玉米ZmELF4 基因的初步功能验证第55-73页
 1. 材料与方法第55-65页
   ·材料第55页
   ·酶和试剂第55-56页
   ·菌株与质粒载体第56页
   ·主要仪器设备第56页
   ·实验方法第56-65页
     ·亚细胞定位实验方法第56-61页
       ·融合表达载体的构建第56-57页
       ·轰击前洋葱表皮的培养第57-58页
       ·金粉悬液制备第58-59页
       ·微弹制备(6 枪量)第59页
       ·基因枪轰击前操作第59-60页
       ·基因枪轰击操作步骤(PDS-1000/He 型基因枪)第60页
       ·轰击后洋葱表皮的培养第60页
       ·荧光显微镜观察第60-61页
     ·拟南芥过量表达实验第61-65页
       ·过量表达载体的构建第61-62页
       ·拟南芥转化第62-64页
       ·转基因拟南芥的筛选鉴定第64-65页
       ·转基因拟南芥植株的表型鉴定第65页
 2. 结果与分析第65-72页
   ·融合表达表达载体的构建第65-66页
   ·洋葱表皮瞬时表达结果第66-67页
   ·ZmELF4 基因过量表达载体的构建第67-68页
   ·重组质粒PBI-ZmELF4 转化农杆菌第68-69页
   ·转基因拟南芥的筛选第69页
   ·转基因拟南芥的PCR 验证第69-70页
   ·转基因拟南芥的表型观察与比较第70-72页
 3. 讨论第72-73页
   ·玉米ZmELF4 是核定位蛋白第72页
   ·玉米 ZmELF4 基因具有与拟南芥ELF4 基因相似的功能第72页
   ·玉米ZmELF4 基因在功能验证上需要进一步探讨的问题第72-73页
参考文献第73-79页
ABSTRACT第79-80页

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