致谢 | 第1-9页 |
摘要 | 第9-11页 |
第一章 文献综述 | 第11-30页 |
1. 植物的光周期现象及其分子机制的研究进展 | 第11-19页 |
·光周期及光周期敏感现象 | 第11页 |
·光周期中光期和暗期的作用 | 第11-12页 |
·拟南芥光周期作用分子机制的研究进展 | 第12-18页 |
·光受体 | 第12-14页 |
·生物钟组分 | 第14-16页 |
·下游的转录调控因子 | 第16页 |
·成花信号综合子 | 第16-17页 |
·抑制因子 | 第17-18页 |
·水稻光周期作用分子机制的研究进展 | 第18-19页 |
2. 玉米光周期敏感现象的研究进展 | 第19-22页 |
·玉米光周期敏感现象 | 第19页 |
·玉米光周期敏感指标及特性 | 第19-20页 |
·玉米光周期敏感时期的研究 | 第20页 |
·玉米光周期敏感相关基因的定位研究 | 第20-21页 |
·玉米光周期敏感相关基因的克隆与研究 | 第21-22页 |
3. 拟南芥ELF4 基因及其在其它物种中同源基因的研究进展 | 第22-23页 |
·拟南芥ELF4 基因的研究进展 | 第22-23页 |
·ELF4-like 基因在其它物种中同源基因的研究进展 | 第23页 |
4. 同源序列克隆法 | 第23-25页 |
·基因同源序列克隆法的原理 | 第23-24页 |
·同源序列克隆法的优点及存在的问题 | 第24-25页 |
5. 实时荧光定量PCR 技术 | 第25-26页 |
·实时荧光定量 PCR 技术原理 | 第25-26页 |
·实时荧光定量 PCR 技术的优点 | 第26页 |
6. 亚细胞定位技术 | 第26-28页 |
·免疫荧光技术 | 第27页 |
·免疫胶体金标记 | 第27页 |
·融合报告基因定位法 | 第27-28页 |
7. 拟南芥转基因方法的研究 | 第28-30页 |
第二章 玉米光周期敏感基因ZmELF4 的克隆 | 第30-44页 |
1. 材料与方法 | 第30-35页 |
·实验材料 | 第30-31页 |
·试剂与仪器 | 第31页 |
·方法 | 第31-35页 |
·总 RNA 的提取与纯化 | 第31-32页 |
·DNA 的提取与纯化 | 第32-33页 |
·cDNA 第一链的合成 | 第33-34页 |
·玉米ZmELF4 基因片段的克隆 | 第34-35页 |
·玉米ZmELF4 基因的PCR 扩增 | 第34页 |
·玉米ZmELF4 基因PCR 扩增产物的回收、连接与转化 | 第34-35页 |
·测序结果分析 | 第35页 |
2. 结果与分析 | 第35-42页 |
·RNA 提取、纯化、第一链合成及检测 | 第35-36页 |
·玉米ZmELF4 基因的克隆与分析 | 第36-42页 |
·玉米ZmELF4 基因的克隆 | 第36页 |
·玉米ZmELF4 基因序列分析 | 第36-42页 |
·CML288 和黄早4 中ZmELF4 基因cDNA、DNA 和氨基酸序列的比较分析 | 第36-38页 |
·ZmELF4 基因的序列分析 | 第38-40页 |
·玉米ZmELF4 基因的氨基酸序列分析 | 第40-41页 |
·玉米 ZmELF4 基因的两种转录方式 | 第41-42页 |
3. 讨论 | 第42-44页 |
·玉米ZmELF4 基因是ELF4/OsELF4 基因的同源基因 | 第42-43页 |
·玉米ZmELF4 基因下一步亟待需要探讨的问题 | 第43-44页 |
第三章 玉米ZmELF4 基因及其相关基因的表达分析 | 第44-55页 |
1. 材料与方法 | 第44-46页 |
·供试材料 | 第44-45页 |
·光周期处理与取样 | 第45页 |
·试剂与仪器 | 第45页 |
·方法 | 第45-46页 |
·总 RNA 的提取与纯化 | 第45页 |
·cDNA 第一链的合成 | 第45页 |
·荧光定量 PCR 引物的设计 | 第45-46页 |
·标准品的制备和标准曲线的建立 | 第46页 |
·样品检测与数据处理 | 第46页 |
2. 结果与分析 | 第46-52页 |
·基因标准曲线的建立 | 第46-47页 |
·基因表达模式的研究 | 第47-52页 |
·ZmELF4 基因的节律表达模式 | 第47-49页 |
·ZmELF4 基因不同生长发育阶段在叶片与茎尖中的表达规律 | 第49-50页 |
·ZmELF4 基因在玉米不同组织部位的表达 | 第50页 |
·ZmELF4 基因与ZmCCA1 基因的表达关系 | 第50-51页 |
·ZmELF4 基因与ZmCOL 基因之间的表达关系 | 第51-52页 |
3. 讨论 | 第52-55页 |
·ZmELF4 基因周期表达模式及与ZmCCA1 基因之间的表达关系的探讨 | 第52-53页 |
·ZmELF4 与ZmCOL 相互作用共同调控玉米光周期诱导开花的过程 | 第53页 |
·玉米ZmELF4 基因在表达水平上需要进一步探讨的问题 | 第53-55页 |
第四章 玉米ZmELF4 基因的初步功能验证 | 第55-73页 |
1. 材料与方法 | 第55-65页 |
·材料 | 第55页 |
·酶和试剂 | 第55-56页 |
·菌株与质粒载体 | 第56页 |
·主要仪器设备 | 第56页 |
·实验方法 | 第56-65页 |
·亚细胞定位实验方法 | 第56-61页 |
·融合表达载体的构建 | 第56-57页 |
·轰击前洋葱表皮的培养 | 第57-58页 |
·金粉悬液制备 | 第58-59页 |
·微弹制备(6 枪量) | 第59页 |
·基因枪轰击前操作 | 第59-60页 |
·基因枪轰击操作步骤(PDS-1000/He 型基因枪) | 第60页 |
·轰击后洋葱表皮的培养 | 第60页 |
·荧光显微镜观察 | 第60-61页 |
·拟南芥过量表达实验 | 第61-65页 |
·过量表达载体的构建 | 第61-62页 |
·拟南芥转化 | 第62-64页 |
·转基因拟南芥的筛选鉴定 | 第64-65页 |
·转基因拟南芥植株的表型鉴定 | 第65页 |
2. 结果与分析 | 第65-72页 |
·融合表达表达载体的构建 | 第65-66页 |
·洋葱表皮瞬时表达结果 | 第66-67页 |
·ZmELF4 基因过量表达载体的构建 | 第67-68页 |
·重组质粒PBI-ZmELF4 转化农杆菌 | 第68-69页 |
·转基因拟南芥的筛选 | 第69页 |
·转基因拟南芥的PCR 验证 | 第69-70页 |
·转基因拟南芥的表型观察与比较 | 第70-72页 |
3. 讨论 | 第72-73页 |
·玉米ZmELF4 是核定位蛋白 | 第72页 |
·玉米 ZmELF4 基因具有与拟南芥ELF4 基因相似的功能 | 第72页 |
·玉米ZmELF4 基因在功能验证上需要进一步探讨的问题 | 第72-73页 |
参考文献 | 第73-79页 |
ABSTRACT | 第79-80页 |