| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-14页 |
| Catalogue | 第14-19页 |
| 第一章 综述 | 第19-32页 |
| 1 盐藻及其耐盐机制的研究进展 | 第19-27页 |
| ·盐藻概述 | 第19-20页 |
| ·盐藻耐盐机制 | 第20-27页 |
| ·引言 | 第20-21页 |
| ·瞬时响应 | 第21-23页 |
| ·短时响应 | 第23-24页 |
| ·长时响应 | 第24-25页 |
| ·信号转导 | 第25-26页 |
| ·盐藻耐盐机制的应用、前景和展望 | 第26-27页 |
| 2 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶及其耐盐机制的研究进展 | 第27-31页 |
| ·丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶概述 | 第27页 |
| ·丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶耐盐方面的研究进展 | 第27-31页 |
| ·MAPK 级联途径 | 第28页 |
| ·钙依赖蛋白激酶（CDPK） | 第28-29页 |
| ·SOS2 | 第29-30页 |
| ·其它丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 | 第30页 |
| ·本研究中的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 | 第30-31页 |
| 3 研究目的和意义 | 第31页 |
| 4 研究内容 | 第31-32页 |
| 第二章 盐藻 DsSTPK 基因全长 cDNA 的克隆 | 第32-47页 |
| 1 实验材料 | 第32-33页 |
| ·藻种 | 第32页 |
| ·菌种和质粒 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·实验仪器 | 第32-33页 |
| 2 实验方法 | 第33-41页 |
| ·盐藻总 RNA 的提取 | 第33页 |
| ·PCR 扩增 DsSTPK 中间段保守序列 | 第33-35页 |
| ·氨基酸多序列比对和兼并引物的设计 | 第33-34页 |
| ·反转录 | 第34页 |
| ·中间段保守序列的 PCR 扩增 | 第34-35页 |
| ·凝胶回收、连接、转化 | 第35-36页 |
| ·凝胶回收 | 第35页 |
| ·感受态细胞的制备及转化效率的测定 | 第35-36页 |
| ·目的基因与 pMD18-T 载体连接和转化 | 第36页 |
| ·酶切和质粒 PCR 鉴定 | 第36-38页 |
| ·质粒提取 | 第36-37页 |
| ·酶切和质粒 PCR | 第37-38页 |
| ·RACE 扩增 DsSTPK 的 5′末端和 3′末端 | 第38-40页 |
| ·RACE 引物的设计 | 第38-39页 |
| ·RACE 反转录 | 第39页 |
| ·RACE 扩增 | 第39-40页 |
| ·目的片段的检测 | 第40页 |
| ·PCR 扩增 DsSTPK 全长序列 | 第40-41页 |
| ·扩全长序列引物的设计 | 第40-41页 |
| ·全长序列 PCR 扩增 | 第41页 |
| ·目的片段的检测 | 第41页 |
| 3 实验结果 | 第41-45页 |
| ·盐藻总 RNA 的提取 | 第41-42页 |
| ·PCR 扩增 DsSTPK 中间段保守序列 | 第42-43页 |
| ·氨基酸多序列比对和兼并引物的设计 | 第42页 |
| ·中间段保守序列的 PCR 扩增和酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·RACE 扩增 DsSTPK 的 5′末端和 3′末端 | 第43-44页 |
| ·PCR 扩增 DsSTPK 全长序列 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| ·RNA 的提取 | 第45页 |
| ·简并引物设计 | 第45-46页 |
| ·RACE 扩增 | 第46-47页 |
| 第三章 盐藻 DsSTPK 基因的生物信息学分析 | 第47-65页 |
| 1 分析方法 | 第47-50页 |
| ·核酸序列分析 | 第47页 |
| ·核酸序列组成分析 | 第47页 |
| ·开放阅读框(ORF)分析 | 第47页 |
| ·稀有密码子和酶切位点分析 | 第47页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第47-49页 |
| ·氨基酸序列基本理化性质分析 | 第47-48页 |
| ·亚细胞定位分析 | 第48页 |
| ·跨膜区预测 | 第48页 |
| ·信号肽分析 | 第48页 |
| ·保守结构域和功能区预测 | 第48页 |
| ·磷酸化位点预测 | 第48页 |
| ·蛋白质高级结构预测 | 第48页 |
| ·进化分析 | 第48-49页 |
| ·蛋白活性预测 | 第49-50页 |
| ·底物蛋白预测 | 第49页 |
| ·激活底物预测—分子对接方法 | 第49-50页 |
| 2 分析结果 | 第50-63页 |
| ·核酸序列分析 | 第50-53页 |
| ·核酸序列组成分析 | 第50-51页 |
| ·开放阅读框(ORF)分析 | 第51-52页 |
| ·稀有密码子和酶切位点分析 | 第52-53页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第53-60页 |
| ·氨基酸基本理化性质分析 | 第53页 |
| ·亚细胞定位分析 | 第53-54页 |
| ·跨膜区预测 | 第54页 |
| ·信号肽分析 | 第54-56页 |
| ·保守结构域和功能区预测 | 第56页 |
| ·磷酸化位点预测 | 第56-57页 |
| ·蛋白质高级结构预测 | 第57-58页 |
| ·进化分析 | 第58-60页 |
| ·蛋白活性预测 | 第60-63页 |
| ·底物蛋白预测 | 第60-61页 |
| ·激活底物预测—对接结果 | 第61-63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| ·生物信息学分析的方法 | 第63页 |
| ·DsSTPK 在细胞信号转导中的位置推测 | 第63-64页 |
| ·DsSTPK 活性测定 | 第64页 |
| ·分子对接 | 第64-65页 |
| 第四章 高盐胁迫对盐藻 DsSTPK 基因转录水平的影响 | 第65-73页 |
| 1 实验材料 | 第65页 |
| ·藻种 | 第65页 |
| ·菌种和质粒 | 第65页 |
| ·主要试剂 | 第65页 |
| ·实验仪器 | 第65页 |
| 2 实验方法 | 第65-68页 |
| ·盐藻高盐胁迫处理 | 第65-66页 |
| ·盐藻总 RNA 的提取和质量的检测 | 第66页 |
| ·反转录 | 第66页 |
| ·特异引物和内参引物的设计及验证 | 第66-67页 |
| ·标准曲线的制作 | 第67页 |
| ·荧光定量 PCR | 第67-68页 |
| ·荧光定量 PCR 实验结果的处理 | 第68页 |
| 3 实验结果 | 第68-70页 |
| ·盐藻总 RNA 质量和浓度的检测 | 第68-69页 |
| ·引物特异性的检验 | 第69页 |
| ·标准曲线的制作 | 第69页 |
| ·荧光定量 PCR 结果 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-73页 |
| ·荧光定量 PCR | 第70-71页 |
| ·胁迫时间点的选择 | 第71-72页 |
| ·DsSTPK 在盐藻耐盐机制中的作用 | 第72-73页 |
| 第五章 盐藻 DsSTPK 基因的原核表达 | 第73-84页 |
| 1 实验材料 | 第73-74页 |
| ·藻种 | 第73页 |
| ·菌种和质粒 | 第73页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·实验仪器 | 第73-74页 |
| 2 实验方法 | 第74-79页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第74-76页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第76-77页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第76页 |
| ·诱导表达 | 第76-77页 |
| ·融合蛋白的可溶性分析 | 第77页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第77-78页 |
| ·上样样品的制备 | 第77-78页 |
| ·His60 Ni Gravity Columns 纯化 | 第78页 |
| ·Western blotting 检测 | 第78-79页 |
| ·Bradford 法测定蛋白质浓度 | 第79页 |
| 3 实验结果 | 第79-82页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第79-80页 |
| ·融合蛋白的诱导表达及表达形式分析 | 第80-81页 |
| ·融合蛋白的纯化、鉴定 | 第81-82页 |
| ·Bradford 法测定蛋白质浓度 | 第82页 |
| 4 讨论 | 第82-84页 |
| 结论与展望 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-93页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第93-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 附录 | 第97-98页 |
