| 缩略词表 | 第1-11页 |
| 摘要 | 第11-16页 |
| Abstract | 第16-22页 |
| 第一章 研究背景和立题依据 | 第22-40页 |
| ·研究背景 | 第22-38页 |
| ·木聚糖 | 第22-26页 |
| ·木聚糖的结构和分类 | 第22-24页 |
| ·木聚糖的降解 | 第24-26页 |
| ·木聚糖酶 | 第26-34页 |
| ·木聚糖酶的定义 | 第26页 |
| ·木聚糖酶的分类 | 第26-27页 |
| ·木聚糖酶的催化机制 | 第27-29页 |
| ·木聚糖酶的分子结构与功能 | 第29-31页 |
| ·木聚糖酶的应用 | 第31-34页 |
| ·木聚糖酶的基因工程 | 第34页 |
| ·海洋木聚糖酶的研究进展 | 第34-38页 |
| ·糖苷水解酶与海洋碳循环 | 第34-36页 |
| ·海洋来源的木聚糖酶 | 第36-38页 |
| ·立题依据和研究内容 | 第38-40页 |
| ·立题依据 | 第38页 |
| ·研究内容 | 第38-40页 |
| 第二章 海洋细菌Glaciecola mesophila KMM241产木聚糖酶XynB的基因克隆和序列分析 | 第40-60页 |
| ·实验材料、仪器和软件 | 第40-43页 |
| ·菌株和质粒 | 第40页 |
| ·培养基 | 第40-41页 |
| ·主要试剂、药品和试剂盒 | 第41-42页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第42页 |
| ·数据库及分析软件 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-47页 |
| ·菌株的培养 | 第43页 |
| ·菌株Glaciecola mesophila KMM241产木聚糖酶的检测 | 第43-44页 |
| ·木聚糖酶活的平板检测 | 第43页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE | 第43-44页 |
| ·酶谱分析 | 第44页 |
| ·木聚糖酶XynB的基因克隆和序列测定 | 第44-46页 |
| ·Glaciecola mesophila KMM241基因组DNA的提取 | 第44-45页 |
| ·引物设计 | 第45页 |
| ·PCR反应体系和反应程序 | 第45-46页 |
| ·基因片段的回收、连接和转化 | 第46页 |
| ·重组转化子的筛选和基因测序 | 第46页 |
| ·木聚糖酶基因xynB的序列分析和同源模建 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-57页 |
| ·菌株Glaciecola mesophila KMM241产木聚糖酶 | 第47-48页 |
| ·木聚糖酶XynB的基因克隆和测序 | 第48-50页 |
| ·木聚糖酶基因xynB的序列分析和同源模建 | 第50-57页 |
| ·木聚糖酶基因xynB的序列比对和XynB的结构域分析 | 第50-56页 |
| ·XynB的催化结构域的同源模建 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-60页 |
| 第三章 木聚糖酶XynB的异源表达、分离纯化和酶学性质研究 | 第60-90页 |
| ·实验材料、仪器和软件 | 第60-62页 |
| ·菌株和质粒 | 第60页 |
| ·培养基 | 第60-61页 |
| ·主要试剂、药品和试剂盒 | 第61页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第61-62页 |
| ·实验方法 | 第62-69页 |
| ·菌株的培养 | 第62页 |
| ·表达载体pET-22b-xynB的构建 | 第62-64页 |
| ·引物设计 | 第62-63页 |
| ·PCR反应体系和反应程序 | 第63页 |
| ·PCR反应产物的回收、酶切、连接和转化 | 第63-64页 |
| ·重组转化子的筛选和鉴定 | 第64页 |
| ·木聚糖酶XynB在E.coli BL21(DE3)中的表达 | 第64-65页 |
| ·重组木聚糖酶XynB的分离纯化 | 第65-66页 |
| ·木聚糖酶酶活的测定 | 第66页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第66-67页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第67页 |
| ·重组木聚糖酶XynB的酶学性质研究方法 | 第67-69页 |
| ·重组酶XynB的底物特异性实验 | 第67页 |
| ·重组酶XynB的底物特异性实验 | 第67-68页 |
| ·重组酶XynB最适酶活温度和热稳定性测定 | 第68页 |
| ·金属离子和化学试剂对重组酶XynB活性影响的测定 | 第68页 |
| ·NaCl对重组酶XynB活性影响的测定 | 第68-69页 |
| ·重组酶XynB对木聚糖的动力学参数测定 | 第69页 |
| ·重组酶XynB对木寡糖酶解产物的测定 | 第69页 |
| ·结果与分析 | 第69-86页 |
| ·重组酶XynB在E.coli BL21(DE3)中的表达 | 第69-75页 |
| ·表达载体pET-22b-xynB的构建 | 第69-70页 |
| ·XynB在E.coli BL21中的表达以及产酶条件的优化 | 第70-75页 |
| ·重组酶XynB的分离纯化 | 第75-77页 |
| ·重组酶XynB的基本酶学性质 | 第77-86页 |
| ·重组酶XynB的底物特异性分析 | 第77-78页 |
| ·pH对重组木聚糖酶XynB活性稳定性的影响 | 第78-80页 |
| ·温度对重组木聚糖酶XynB活性及稳定性的影响 | 第80-81页 |
| ·金属离子和化学试剂对重组酶XynB酶活性的影响 | 第81-82页 |
| ·重组酶XynB的NaCl耐受性 | 第82-84页 |
| ·重组酶XynB对木聚糖的动力学参数 | 第84-85页 |
| ·重组酶XynB酶解木寡糖产物分析 | 第85-86页 |
| ·讨论 | 第86-90页 |
| 第四章 XynB的N端结构域的异源表达及其对不可溶多糖的结合功能研究 | 第90-102页 |
| ·实验材料、仪器和软件 | 第90-91页 |
| ·菌株和质粒 | 第90页 |
| ·培养基 | 第90-91页 |
| ·主要试剂、药品和试剂盒 | 第91页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第91页 |
| ·实验方法 | 第91-94页 |
| ·菌株的培养 | 第91页 |
| ·木聚糖酶XynB的N端结构域(NTD)的异源表达 | 第91-93页 |
| ·引物设计 | 第91-92页 |
| ·PCR以及表达载体的构建 | 第92页 |
| ·重组NTD在E.coli BL21(DE3)中的表达 | 第92-93页 |
| ·重组NTD的分离纯化 | 第93页 |
| ·NTD结构域对不可溶多糖的结合功能检测 | 第93-94页 |
| ·不可溶木聚糖的制备 | 第93页 |
| ·NTD结构域对不可溶多糖的结合作用 | 第93-94页 |
| ·结果与分析 | 第94-100页 |
| ·NTD结构域在E.coli BL21(DE3)中的表达 | 第94-97页 |
| ·表达载体pET-22b-ntd的构建 | 第94-95页 |
| ·NTD结构域的表达和分离纯化 | 第95-97页 |
| ·NTD结构域对不可溶多糖的结合作用 | 第97-100页 |
| ·讨论 | 第100-102页 |
| 第五章 XynB的NTD结构域的晶体培养及优化 | 第102-112页 |
| ·实验材料、仪器和软件 | 第102-103页 |
| ·菌株和质粒 | 第102页 |
| ·培养基 | 第102-103页 |
| ·主要试剂、药品和试剂盒 | 第103页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第103页 |
| ·实验方法 | 第103-105页 |
| ·菌株的培养 | 第103页 |
| ·重组NTD的大量纯化以及结晶前蛋白样品的处理 | 第103-104页 |
| ·蛋白晶体的培养和条件优化 | 第104-105页 |
| ·结果与分析 | 第105-110页 |
| ·重组NTD的大量纯化 | 第105-108页 |
| ·蛋白晶体的初筛 | 第108-109页 |
| ·蛋白晶体的复筛优化 | 第109-110页 |
| ·讨论 | 第110-112页 |
| 第六章 适冷木聚糖酶XynA在提高面包品质中的应用潜力研究 | 第112-126页 |
| ·实验材料、仪器和软件 | 第112-113页 |
| ·菌株和质粒 | 第112页 |
| ·培养基 | 第112-113页 |
| ·主要试剂、药品和试剂盒 | 第113页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第113页 |
| ·实验方法 | 第113-117页 |
| ·重组适冷木聚糖酶XynA的表达和分离纯化 | 第113-114页 |
| ·拟康氏木霉K9301产中温木聚糖酶EX1的分离纯化 | 第114-115页 |
| ·木聚糖酶酶活测定 | 第115页 |
| ·面粉粉质特性的测定 | 第115-116页 |
| ·面包的配方和工艺 | 第116页 |
| ·面包的基本配方 | 第116页 |
| ·面包的制作工艺流程 | 第116页 |
| ·面包品质的测定 | 第116-117页 |
| ·面包质构的测定 | 第117页 |
| ·结果与分析 | 第117-123页 |
| ·重组适冷木聚糖酶XynA和中温木聚糖酶的表达和分离纯化 | 第117-119页 |
| ·木聚糖酶对面粉粉质特性的影响 | 第119-120页 |
| ·木聚糖酶对面包品质的影响 | 第120-122页 |
| ·木聚糖酶对面包老化的影响 | 第122-123页 |
| ·讨论 | 第123-126页 |
| 全文总结与展望 | 第126-130页 |
| 参考文献 | 第130-146页 |
| 在读期间发表的论文、获得的专利与奖励 | 第146-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
| 附录 | 第148-170页 |
| 附表 | 第170页 |
