| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-13页 |
| 文献综述 | 第13-24页 |
| 引言 | 第13页 |
| ·转录因子的概念 | 第13页 |
| ·转录因子的结构 | 第13-15页 |
| ·DNA结合区 | 第13-14页 |
| ·转录调控区 | 第14页 |
| ·寡聚化位点 | 第14-15页 |
| ·核定位信号区 | 第15页 |
| ·植物中的主要转录因子 | 第15-17页 |
| ·AP2/ERF类转录因子 | 第15-16页 |
| ·bZIP类转录因子 | 第16页 |
| ·MYB类转录因子 | 第16页 |
| ·NAC类转录因子 | 第16-17页 |
| ·植物中的WRKY类转录因子 | 第17-23页 |
| ·WRKY类转录因子的结构特点及其分类 | 第18-19页 |
| ·WRKY类转录因子的生物学功能 | 第19-23页 |
| ·在植物防卫反应中的作用 | 第20-21页 |
| ·在植物生长发育中的调节作用 | 第21-22页 |
| ·在植物代谢中的调节作用 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第23页 |
| ·本研究技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-46页 |
| ·材料与试剂 | 第24-25页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·菌株及载体 | 第24页 |
| ·菌种 | 第24页 |
| ·载体 | 第24页 |
| ·生化试剂 | 第24页 |
| ·常用培养基的配制 | 第24-25页 |
| ·方法与步骤 | 第25-46页 |
| ·RNA的提取 | 第25-27页 |
| ·准备工作 | 第25页 |
| ·橡胶树胶乳Total RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·橡胶树树皮、树根、花和叶片Total RNA的提取 | 第26页 |
| ·RNA电泳检测 | 第26-27页 |
| ·cDNA的合成 | 第27页 |
| ·5'RACE扩增HbWRKY1的5'端 | 第27-32页 |
| ·1st Strand cDNA的合成 | 第28页 |
| ·Hybrid RNA的分解 | 第28页 |
| ·通过连接反应将单链cDNA环化 | 第28-29页 |
| ·PCR反应 | 第29页 |
| ·第一轮PCR反应 | 第29页 |
| ·第二轮PCR反应 | 第29页 |
| ·PCR产物的回收 | 第29-30页 |
| ·PCR目的片段的克隆及其重组子筛选 | 第30-32页 |
| ·连接反应 | 第30页 |
| ·感受态E.coli DH5α的制备 | 第30-31页 |
| ·感受态鉴定 | 第31页 |
| ·转化 | 第31页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·重组子菌种的保存 | 第32页 |
| ·3'RACE扩增HbWRKY1的3'端 | 第32-34页 |
| ·反转录反应 | 第32-33页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·PCR产物的回收 | 第34页 |
| ·目的片段的克隆及其重组子筛选 | 第34页 |
| ·HbWRKY1全长cDNA的PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·引物设计 | 第34页 |
| ·PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·PCR产物的回收 | 第35页 |
| ·PCR目的片段的克隆及重组子的筛选 | 第35页 |
| ·HbWRKY1启动子区域的扩增 | 第35-38页 |
| ·叶片基因组DNA的提取 | 第35页 |
| ·引物设计 | 第35-36页 |
| ·叶片基因组DNA酶切 | 第36页 |
| ·酶切基因组DNA的纯化 | 第36页 |
| ·基因组DNA与GenomeWalker接头的连接 | 第36-37页 |
| ·第一轮PCR扩增 | 第37页 |
| ·第二轮PCR扩增 | 第37页 |
| ·PCR产物的回收 | 第37-38页 |
| ·目的片段的克隆及其重组子筛选 | 第38页 |
| ·HbWRKY1的RT-PCR表达分析 | 第38-39页 |
| ·材料的处理 | 第38页 |
| ·RNA的提取 | 第38页 |
| ·cDNA的合成 | 第38页 |
| ·模板量的确定 | 第38页 |
| ·指数增长期的确定 | 第38-39页 |
| ·18SrRNA基因指数增长期的确定 | 第38-39页 |
| ·HbWRKY1基因指数增长期的确定 | 第39页 |
| ·RT-PCR分析 | 第39页 |
| ·HbWRKY1基因的原核表达 | 第39-41页 |
| ·表达载体的构建与鉴定 | 第39-40页 |
| ·HbWRKY1基因的酶切 | 第39-40页 |
| ·原核表达载体pGEX6p-1的酶切 | 第40页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第40页 |
| ·重组子的筛选鉴定 | 第40页 |
| ·工程菌的表达 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第41页 |
| ·根癌农杆菌介导转化烟草 | 第41-46页 |
| ·表达载体的构建与鉴定(见图5) | 第41-43页 |
| ·HbWRKY1基因的酶切 | 第41-42页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1304的酶切 | 第42页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第42-43页 |
| ·重组子的筛选鉴定 | 第43页 |
| ·农杆菌电击感受态细胞制备 | 第43-44页 |
| ·重组表达载体pCAMBIA1304- HbWRKY1电击转化农杆菌感受态细胞 | 第44页 |
| ·阳性农杆菌菌株的鉴定 | 第44页 |
| ·工程菌的准备 | 第44页 |
| ·侵染及移栽 | 第44页 |
| ·共转化植株的PCR检测 | 第44-46页 |
| ·烟草基因组DNA的提取 | 第44-45页 |
| ·共转化植株的PCR检测 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-66页 |
| ·RNA的提取 | 第46页 |
| ·HbWRKY1基因的克隆 | 第46-49页 |
| ·5'RACE扩增HbWRKY1的5'端 | 第46页 |
| ·3'RACE扩增HbWRKY1的3'端 | 第46-47页 |
| ·HbWRKY1全长的克隆 | 第47-49页 |
| ·HbWRKY1启动子区域的克隆 | 第49-53页 |
| ·GenomeWalker文库构建与GenomeWalker DNA walking | 第49-50页 |
| ·HbWRKY1的5'调控区序列分析 | 第50-53页 |
| ·HbWRKY1的生物信息学分析 | 第53-56页 |
| ·HbWRKY1蛋白质的特性分析 | 第53-54页 |
| ·HbWKY1系统进化树分析 | 第54-55页 |
| ·HbWRKY1的亚细胞定位及功能分类 | 第55-56页 |
| ·HbWRKY1的RT-PCR分析 | 第56-60页 |
| ·指数增长期的确定 | 第56-57页 |
| ·HbWRKY1在不同组织的表达分析 | 第57页 |
| ·不同胁迫对叶片(及胶乳)HbWRKY1表达的影响 | 第57-58页 |
| ·不同激素刺激对叶片(及胶乳)HbWRKY1表达的影响 | 第58-60页 |
| ·HbWRKY1的原核表达 | 第60-61页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第60页 |
| ·HbWRKY1的原核表达 | 第60-61页 |
| ·根癌农杆菌介导HbWRKY1转化烟草 | 第61-66页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第61-62页 |
| ·烟草转化 | 第62-63页 |
| ·阳性转基因植物的鉴定 | 第63页 |
| ·HbWRKY1过量表达植株对干旱胁迫应答的初步研究 | 第63-64页 |
| ·HbWRKY1过量表达植株对高温胁迫应答的初步研究 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-69页 |
| ·关于采样的方法 | 第66页 |
| ·关于HbWRKY1基因的功能 | 第66-68页 |
| ·关于HbWRKY1基因的5'端调控序列 | 第68-69页 |
| 5 结果与结论 | 第69-70页 |
| ·研究结果 | 第69页 |
| ·结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 缩略词表 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
