| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-22页 |
| ·铜蛋白的研究进展 | 第10-15页 |
| ·电子传递 | 第11-13页 |
| ·氧的输送 | 第13-14页 |
| ·氧化还原 | 第14-15页 |
| ·蓝铜蛋白研究现状 | 第15-21页 |
| ·蓝铜蛋白性质介绍 | 第16-17页 |
| ·晶体结构与功能 | 第17-19页 |
| ·电子传递 | 第19-21页 |
| ·课题研究的目的与研究内容 | 第21-22页 |
| ·依据与目的 | 第21页 |
| ·论文的主要研究内容 | 第21-22页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第22-34页 |
| ·实验材料 | 第22-26页 |
| ·菌种 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·A. ferrooxidans 菌基因组抽提试剂 | 第22-23页 |
| ·质粒提取试剂 | 第23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第23页 |
| ·胶回收试剂 | 第23页 |
| ·不连续体系 SDS-PAGE 电泳 | 第23-24页 |
| ·SDS-PAGE 胶保存试剂及装置 | 第24-25页 |
| ·蛋白纯化试剂 | 第25页 |
| ·实验仪器与设备 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-31页 |
| ·PCR 扩增 | 第26-27页 |
| ·酶切 PCR 产物及载体 pLM 1 | 第27页 |
| ·载体和目的片段连接反应 | 第27页 |
| ·转化 | 第27-28页 |
| ·挑取阳性单克隆 | 第28页 |
| ·蛋白质表达转化 | 第28-29页 |
| ·蛋白质的条件表达 | 第29页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第29-30页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第30-31页 |
| ·定点突变 | 第31-32页 |
| ·引物的设计 | 第31页 |
| ·PCR 扩增 | 第31-32页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第32页 |
| ·突变蛋白质的表达及纯化 | 第32页 |
| ·测试分析方法 | 第32-34页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32-33页 |
| ·紫外分光光度计 | 第33页 |
| ·分子结构模型图的模拟 | 第33-34页 |
| 第3章 蓝铜蛋白表达纯化及性质研究 | 第34-42页 |
| ·蓝铜蛋白重组质粒的获得及鉴定 | 第34-35页 |
| ·蓝铜蛋白基因的克隆 | 第34页 |
| ·蓝铜蛋白基因的连接及阳性克隆的筛选 | 第34-35页 |
| ·蓝铜蛋白的表达及纯化 | 第35-37页 |
| ·蓝铜蛋白表达条件的确定 | 第35-36页 |
| ·蓝铜蛋白大规模的表达及纯化 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE 分析蓝铜蛋白 | 第36-37页 |
| ·紫外分析蓝铜蛋白的性质 | 第37-40页 |
| ·蓝铜蛋白氧化还原性质分析 | 第37-38页 |
| ·蓝铜蛋白与 IRO 的电子传递分析 | 第38-40页 |
| ·分子模拟蓝铜蛋白 | 第40-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第4章 蓝铜蛋白定点突变研究 | 第42-52页 |
| ·蓝铜蛋白序列对比 | 第42-44页 |
| ·蓝铜蛋白突变基因的克隆 | 第44页 |
| ·蓝铜蛋白突变蛋白的表达 | 第44-46页 |
| ·蓝铜蛋白 H143G 表达条件的确定 | 第44-45页 |
| ·突变蛋白 H143G 大规模的表达 | 第45页 |
| ·SDS-PAGE 分析纯化的蛋白样品 | 第45-46页 |
| ·UV/VIS 分析突变蛋白 | 第46-49页 |
| ·H143G 突变体性质分析 | 第46-47页 |
| ·咪唑对 H143G 突变体载铜的影响 | 第47-48页 |
| ·咪唑对 H143G 活性的影响 | 第48-49页 |
| ·蓝铜蛋白分子结构模拟图 | 第49-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 附录 A 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |