| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-20页 |
| ·课题的提出 | 第10页 |
| ·柑橘病毒病及类似病害的生物学特性及危害 | 第10-13页 |
| ·柑橘黄龙病的生物学特性及危害 | 第10-11页 |
| ·柑橘碎叶病的生物学特性及危害 | 第11-12页 |
| ·柑橘衰退病的生物学特性及危害 | 第12-13页 |
| ·三种柑橘病害的诊断与检测 | 第13-15页 |
| ·症状诊断 | 第13页 |
| ·电镜观察 | 第13-14页 |
| ·血清学检测 | 第14页 |
| ·分子生物学检测 | 第14-15页 |
| ·柑橘病毒病及类似病害的脱毒方法 | 第15-18页 |
| ·热处理脱毒 | 第15-16页 |
| ·茎尖微芽嫁接脱毒 | 第16页 |
| ·茎尖及珠心组织培养 | 第16-17页 |
| ·抗病毒剂处理 | 第17-18页 |
| ·柑橘黄龙病原菌OMP蛋白 | 第18-19页 |
| ·选题的目的和意义 | 第19-20页 |
| 2 材料和方法 | 第20-30页 |
| ·柑橘带毒材料 | 第20页 |
| ·病原叶 | 第20页 |
| ·细菌菌株和质粒 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要溶液的配制 | 第20-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22页 |
| ·实验中用到的引物 | 第22-23页 |
| ·对带病柑橘苗木进行病毒检测 | 第23页 |
| ·黄龙病检测 | 第23页 |
| ·柑橘碎叶病和衰退病的检测 | 第23页 |
| ·中药试剂的提取与定量 | 第23-24页 |
| ·药剂处理及热处理方法 | 第24-25页 |
| ·带毒桃叶橙脱毒处理方法 | 第24页 |
| ·带毒黔阳无核椪柑和福本脐橙脱毒处理方法 | 第24-25页 |
| ·病毒脱毒情况检测 | 第25页 |
| ·黄龙病病原菌omp编码区的克隆 | 第25-26页 |
| ·omp1片段的PCR引物的设计 | 第25页 |
| ·黄龙病病原菌omp1片段的PCR扩增 | 第25页 |
| ·目的产物回收 | 第25页 |
| ·目的片段T载体克隆 | 第25-26页 |
| ·T载体转化大肠杆菌及阳性克隆筛选 | 第26页 |
| ·建原核表达载体pET-22b-omp | 第26-27页 |
| ·目的基因omp的PCR扩增 | 第26页 |
| ·目的片段omp和pET-22b(+)载体的NcoⅠ/HindⅢ双酶切 | 第26页 |
| ·omp目的片段酶切产物的纯化 | 第26-27页 |
| ·pET-22b(+)载体的酶切产物回收 | 第27页 |
| ·omp基因片段与表达载体pET-22b(+)的连接 | 第27页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌及阳性克隆筛选 | 第27页 |
| ·质粒pET-22b-omp序列测定及分析 | 第27页 |
| ·目的蛋白的诱导表达及最佳条件筛选 | 第27-29页 |
| ·pET-22b-omp载体转表达宿主菌 | 第27页 |
| ·PCR阳性克隆检测 | 第27-28页 |
| ·宿主菌的诱导表达 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第28页 |
| ·诱导条件蹄选 | 第28-29页 |
| ·omp基因截短区域的PCR扩增 | 第29页 |
| ·pET-22b-ompC载体的构建 | 第29页 |
| ·截短蛋白的诱导表达及最佳条件筛选 | 第29页 |
| ·截短蛋白的可溶性分析 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-46页 |
| ·带病柑橘苗木三种病害检测 | 第30-32页 |
| ·柑橘黄龙病抽检结果 | 第30页 |
| ·柑橘碎叶病的抽检结果 | 第30-31页 |
| ·柑橘衰退病的抽检结果 | 第31-32页 |
| ·药剂处理与热处理的脱毒结果 | 第32-34页 |
| ·桃叶橙脱毒检测结果 | 第32-34页 |
| ·福本脐橙和黔阳无核的脱毒检测结果 | 第34页 |
| ·黄龙病病原菌omp编码区的克隆 | 第34-36页 |
| ·黄龙病病原的检测 | 第34-35页 |
| ·黄龙病病原菌omp1片段的PCR扩增 | 第35页 |
| ·目的片段T载体克隆 | 第35-36页 |
| ·构建表达载体pET-22b-omp | 第36-38页 |
| ·omp基因的PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·表达载体pET-22b-omp的构建 | 第37-38页 |
| ·OMP蛋白的诱导表达及最佳条件筛选 | 第38-39页 |
| ·pET-22b-omp载体质粒转表达宿主菌 | 第38页 |
| ·omp基因的表达 | 第38-39页 |
| ·截短蛋白的克隆及表达载体pET-22b-ompC的构建 | 第39-41页 |
| ·全长目的蛋白的结构预测 | 第39-40页 |
| ·截短片段的PCR扩增 | 第40页 |
| ·表达载体pET-22b-ompC的构建 | 第40-41页 |
| ·截短蛋白的诱导表达及最佳条件筛选 | 第41-44页 |
| ·截短蛋白转宿主菌 | 第41-42页 |
| ·截短蛋白的诱导表达条件筛选 | 第42-44页 |
| ·截短蛋白的可溶性分析 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-51页 |
| ·柑橘脱毒方法研究 | 第46-47页 |
| ·omp基因的克隆 | 第47页 |
| ·原核表达载体的选择 | 第47-48页 |
| ·表达菌株的选择 | 第48页 |
| ·蛋白的截短 | 第48-49页 |
| ·截短蛋白的可溶性表达 | 第49-50页 |
| ·下一步工作 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
