| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 英文缩略语 | 第14-17页 |
| 第一部分:文献综述 | 第17-39页 |
| 第1章 奶牛内环境钙磷代谢调节 | 第17-29页 |
| ·钙磷吸收的调节 | 第18-23页 |
| ·维生素D调节系统 | 第18-20页 |
| ·钙吸收的调节 | 第20-21页 |
| ·磷吸收的调节 | 第21-22页 |
| ·钙磷的骨代谢调节 | 第22-23页 |
| ·钙磷的需求量 | 第23-26页 |
| ·奶牛产褥热 | 第26-29页 |
| ·产褥热的发生机制 | 第26-27页 |
| ·产褥热的预防 | 第27-29页 |
| 第2章 胰岛素样生长因子-Ⅰ在骨代谢中的作用 | 第29-39页 |
| ·IGFs系统的组成、IGF-Ⅰ的基因构成和IGF-Ⅰ骨骼分布特点 | 第29-32页 |
| ·IGF-Ⅰ的基因构成 | 第29-30页 |
| ·IGF-Ⅰ受体 | 第30页 |
| ·IGF结合蛋白(IGFBP) | 第30-31页 |
| ·IGF-Ⅰ骨骼分布特点 | 第31-32页 |
| ·IGF-Ⅰ对成骨细胞的作用 | 第32-34页 |
| ·促进成骨细胞分化、增殖、募集 | 第32页 |
| ·促进成骨细胞胶原及骨钙素合成 | 第32-33页 |
| ·IGF-Ⅰ促进成骨细胞对磷的吸收及氨基酸的运输 | 第33-34页 |
| ·IGF-Ⅰ对破骨细胞的影响 | 第34页 |
| ·影响IGF-Ⅰ对骨代谢作用的因素 | 第34-37页 |
| ·年龄和营养因素 | 第34-35页 |
| ·激素对IGF-Ⅰ的影响 | 第35-36页 |
| ·生长激素 | 第35页 |
| ·甲状旁腺激素 | 第35页 |
| ·性激素 | 第35-36页 |
| ·甲状腺激素、糖皮质激素和1,25-双羟维生素D_3 | 第36页 |
| ·其他细胞因子对IGF-Ⅰ的影响 | 第36-37页 |
| ·转化生长因子-β | 第36-37页 |
| ·成纤维细胞生长因子 | 第37页 |
| ·IGF-Ⅰ的临床应用 | 第37-39页 |
| 第二部分 试验研究 | 第39-95页 |
| 第3章 奶牛血浆胰岛素样生长因子-Ⅰ的测定及其与骨代谢相关因子的关系 | 第39-49页 |
| ·研究目的和意义 | 第39-40页 |
| ·材料和方法 | 第40-42页 |
| ·实验设计 | 第40页 |
| ·样品采集及处理 | 第40页 |
| ·指标的测定 | 第40页 |
| ·数据分析 | 第40-42页 |
| ·结果 | 第42-45页 |
| ·日粮组成及钙磷代谢紊乱疾病的临床调查结果 | 第42页 |
| ·奶牛不同泌乳阶段血浆Ca、P、IGF-Ⅰ、ALP、PTH及CT水平的变化 | 第42页 |
| ·不同年龄奶牛血浆Ca、P、IGF-Ⅰ、ALP、PTH及CT水平的变化 | 第42-45页 |
| ·骨代谢病患牛与健康奶牛血浆Ca、P、IGF-Ⅰ、ALP、PTH及CT水平的比较 | 第45页 |
| ·奶牛血清IGF-Ⅰ水平与P、IGF-Ⅰ、ALP、PTH及CT的相关性 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-48页 |
| ·奶牛血浆Ca、P水平与年龄、妊娠的关系 | 第45-46页 |
| ·IGF-Ⅰ与奶牛骨代谢性疾病的关系 | 第46-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第4章 奶牛成骨细胞的体外培养、鉴定及生物特性研究 | 第49-61页 |
| ·研究目的和意义 | 第49页 |
| ·材料和方法 | 第49-52页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第49页 |
| ·细胞的分离与培养 | 第49-50页 |
| ·细胞的传代 | 第50页 |
| ·奶牛成骨细胞的鉴定 | 第50-51页 |
| ·形态学观察 | 第50页 |
| ·改良钙-钴法染色 | 第50页 |
| ·ALP活性测定 | 第50页 |
| ·OC mRNA检测 | 第50-51页 |
| ·OC蛋白检测 | 第51页 |
| ·奶牛成骨细胞的生物特性 | 第51-52页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第51页 |
| ·钙化结节染色 | 第51-52页 |
| ·结果 | 第52-57页 |
| ·细胞形态观察 | 第52页 |
| ·ALP的表达 | 第52-55页 |
| ·RT-PCR扩增OC基因 | 第55页 |
| ·ALP活性及OC蛋白水平的测定 | 第55-56页 |
| ·奶牛成骨细胞增殖曲线 | 第56页 |
| ·钙化结节染色 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| ·奶牛成骨细胞的体外分离培养 | 第57页 |
| ·奶牛成骨细胞特征性鉴定 | 第57-58页 |
| ·奶牛成骨细胞生物特性 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-61页 |
| 第5章 胰岛素样生长因子-Ⅰ对奶牛成骨细胞增殖、分化、矿化及重建的影响 | 第61-79页 |
| ·研究目的和意义 | 第61-62页 |
| ·材料和方法 | 第62-66页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第62页 |
| ·细胞的培养 | 第62页 |
| ·奶牛成骨细胞的鉴定 | 第62-63页 |
| ·MTT法检测细胞增殖效应 | 第63页 |
| ·AAS法检测细胞基质钙含量 | 第63-64页 |
| ·钙结节数量检测 | 第64页 |
| ·ALP及OC活性测定 | 第64页 |
| ·半定量RT-PCR试验 | 第64-66页 |
| ·IGF-Ⅰ干预试验 | 第64页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第64-65页 |
| ·反转录(RT) | 第65页 |
| ·引物设计 | 第65页 |
| ·PCR扩增 | 第65-66页 |
| ·凝胶图像分析 | 第66页 |
| ·OPG蛋白的测定 | 第66页 |
| ·数据分析 | 第66页 |
| ·结果 | 第66-72页 |
| ·奶牛成骨细胞特征性鉴定 | 第66页 |
| ·IGF-Ⅰ对奶牛成骨细胞增殖的影响 | 第66-67页 |
| ·IGF-Ⅰ对奶牛成骨细胞基质Ca、ALP、OC水平及钙化结节数量的影响 | 第67-69页 |
| ·循环数及模板量对PCR产物的影响 | 第69-70页 |
| ·IGF-Ⅰ对奶牛成骨细胞骨代谢相关因子mRNA表达的影响 | 第70-72页 |
| ·IGF-Ⅰ对奶牛成骨细胞OPG蛋白分泌的影响 | 第72页 |
| ·讨论 | 第72-77页 |
| ·IGF-Ⅰ对奶牛成骨细胞增殖的影响 | 第72-73页 |
| ·IGF-Ⅰ对奶牛成骨细胞分化及矿化的影响 | 第73-74页 |
| ·IGF-Ⅰ对奶牛成骨细胞重建的影响 | 第74-77页 |
| ·小结 | 第77-79页 |
| 第6章 IGF-Ⅰ抑制血清饥饿诱导的奶牛成骨细胞凋亡 | 第79-95页 |
| ·研究背景 | 第79页 |
| ·材料与方法 | 第79-82页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第79-80页 |
| ·细胞培养 | 第80页 |
| ·荧光染色 | 第80页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第80页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第80-81页 |
| ·细胞存活率检测 | 第81页 |
| ·Caspase 3活性检测 | 第81-82页 |
| ·pNA标准曲线的绘制 | 第81页 |
| ·样品caspase-3活性的测定 | 第81-82页 |
| ·样品蛋白浓度的测定 | 第82页 |
| ·数据分析 | 第82页 |
| ·结果 | 第82-89页 |
| ·荧光显微镜观察细胞凋亡 | 第82页 |
| ·细胞凋亡DNA断裂条带检测 | 第82-83页 |
| ·MTT法检测细胞存活率 | 第83-87页 |
| ·流失细胞术分析细胞周期及凋亡率 | 第87-89页 |
| ·凋亡蛋白caspasc-3的检测结果 | 第89页 |
| ·讨论 | 第89-93页 |
| ·血清饥饿诱导奶牛成骨细胞凋亡 | 第89-91页 |
| ·IGF-Ⅰ抑制由血清饥饿诱导的奶牛成骨细胞凋亡 | 第91-93页 |
| ·小结 | 第93-95页 |
| 结论 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-115页 |
| 致谢 | 第115-117页 |
| 附录 | 第117页 |
