| 摘要 | 第1-16页 |
| ABSTRACT | 第16-20页 |
| 缩略词表 | 第20-22页 |
| 第一章 绪论 | 第22-45页 |
| ·酿酒酵母介绍 | 第22-23页 |
| ·酿酒酵母作为模式生物的作用 | 第22-23页 |
| ·酿酒酵母在乙醇发酵的应用 | 第23页 |
| ·乙醇压力对细胞的效应 | 第23-28页 |
| ·乙醇对酵母的影响 | 第23-25页 |
| ·压力响应的过程机制 | 第25-28页 |
| ·压力响应信号传导 | 第25-26页 |
| ·压力响应基因表达变化 | 第26-27页 |
| ·压力适应 | 第27-28页 |
| ·酵母细胞转录调控机制 | 第28-34页 |
| ·转录前的准备——染色质的重建 | 第29页 |
| ·转录调节 | 第29-34页 |
| ·顺式作用元件 | 第30-32页 |
| ·通用转录因子 | 第32-33页 |
| ·转录调节因子 | 第33-34页 |
| ·其他调节 | 第34页 |
| ·高通量差异基因表达研究方法 | 第34-38页 |
| ·差异基因表达谱分析 | 第35-38页 |
| ·cDNA微阵列技术 | 第35-37页 |
| ·基因表达系列分析(SAGE) | 第37-38页 |
| ·蛋白组学分析 | 第38页 |
| ·代谢工程改造方法介绍 | 第38-42页 |
| ·理性代谢工程 | 第38-39页 |
| ·反向代谢工程 | 第39页 |
| ·随机改造工程 | 第39-40页 |
| ·全转录工程机制 | 第40-42页 |
| ·SPT15及编码蛋白TBP介绍 | 第41-42页 |
| ·本论文的工作内容 | 第42-45页 |
| 第二章 gTME在酿酒酵母W303-1A中的应用研究 | 第45-64页 |
| ·实验原理 | 第45-46页 |
| ·实验材料与方法 | 第46-56页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·菌株和质粒 | 第46页 |
| ·培养基 | 第46-47页 |
| ·分子生物学常用工具酶 | 第47页 |
| ·常用试剂盒 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47-48页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)用试剂 | 第48页 |
| ·仪器和设备 | 第48-49页 |
| ·分子生物学常用溶液及缓冲液配制 | 第49-51页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用试剂 | 第49页 |
| ·SDS碱裂解法质粒提取试剂 | 第49-50页 |
| ·酵母基因组快速提取试剂 | 第50-51页 |
| ·酿酒酵母电转化试剂 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-56页 |
| ·菌种保存方法 | 第51页 |
| ·细胞活化 | 第51-52页 |
| ·分子生物学常规操作 | 第52页 |
| ·大肠杆菌质粒的快速提取 | 第52页 |
| ·酵母基因组的快速提取 | 第52页 |
| ·PCR引物设计 | 第52-53页 |
| ·PCR反应体系 | 第53-54页 |
| ·PCR反应程序 | 第54页 |
| ·双酶切反应体系 | 第54页 |
| ·目的基因和载体连接反应 | 第54-55页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第55页 |
| ·连接产物的大肠杆菌转化 | 第55页 |
| ·阳性克隆的筛选与测序 | 第55页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第55-56页 |
| ·酵母细胞的电转化方法 | 第56页 |
| ·细胞生长表型分析 | 第56页 |
| ·实验结果 | 第56-60页 |
| ·模板的准备——酿酒酵母W303-1A基因组与质粒pUG6的提取 | 第56-57页 |
| ·点突变等位基因SPT15-300 | 第57-59页 |
| ·重组质粒pRS41K-SPT15和pRS41K-SPT15-300的构建 | 第59-60页 |
| ·生长表型比较 | 第60页 |
| ·讨论 | 第60-63页 |
| ·本章小结 | 第63-64页 |
| 第三章 酿酒酵母W303-1A耐乙醇的定向驯化 | 第64-89页 |
| ·实验流程 | 第65-66页 |
| ·实验材料与方法 | 第66-70页 |
| ·菌株和培养基 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-67页 |
| ·细胞活化 | 第66页 |
| ·定向驯化 | 第66-67页 |
| ·细胞生长比较 | 第67页 |
| ·细胞耐受醇击和热击能力比较 | 第67页 |
| ·表达谱分析 | 第67-70页 |
| ·细胞制备 | 第67-68页 |
| ·RNA的提取及样品制备 | 第68页 |
| ·数据分析 | 第68-70页 |
| ·实验结果 | 第70-84页 |
| ·定向驯化实验 | 第70-71页 |
| ·驯化前后菌体生长比较 | 第71-73页 |
| ·驯化前后细胞的耐醇和热击能力比较 | 第73-74页 |
| ·表达谱分析 | 第74-84页 |
| ·差异表达基因的聚类分析和PCA分析 | 第74-76页 |
| ·差异基因比较分析 | 第76-84页 |
| ·讨论 | 第84-87页 |
| ·本章小结 | 第87-89页 |
| 第四章 gTME改造啤酒酵母Qd001的分子构建及表型分析研究 | 第89-106页 |
| ·实 | 第89-91页 |
| ·实验流程 | 第91-92页 |
| ·实验材料 | 第92-93页 |
| ·菌株和质粒 | 第92页 |
| ·培养基 | 第92-93页 |
| ·实验方法 | 第93-98页 |
| ·目的基因的扩增 | 第93-95页 |
| ·引物设计(表4-1) | 第93-94页 |
| ·PCR反应体系 | 第94-95页 |
| ·PCR反应程序 | 第95页 |
| ·单酶切验证反应 | 第95页 |
| ·目的基因和T载体连接反应 | 第95-96页 |
| ·酿酒酵母的电转化 | 第96页 |
| ·二倍体啤酒酵母Qd001的分子改造 | 第96-97页 |
| ·Qd001基因组上一个SPT15拷贝的敲除 | 第96页 |
| ·质粒pSH47/hphB的构建及电转化 | 第96-97页 |
| ·CRE重组酶的诱导及KanMX基因丢失 | 第97页 |
| ·质粒pSH47/hphB丢失 | 第97页 |
| ·SPT15-300重组菌的构建 | 第97-98页 |
| ·SPT15-300的基因组整合 | 第97页 |
| ·质粒pSH47/hphB的电转化 | 第97页 |
| ·CRE酶的诱导 | 第97页 |
| ·质粒丢失 | 第97-98页 |
| ·细胞表型生长比较 | 第98页 |
| ·结果与讨论 | 第98-105页 |
| ·酿酒酵母基因组上SPT15单拷贝敲除 | 第98-102页 |
| ·KanMX敲除元件的获得 | 第98-99页 |
| ·LFH-PCR敲除元件的电转化 | 第99-100页 |
| ·质粒pSH47/hphB的构建及电转化 | 第100页 |
| ·CRE重组酶的诱导及KanMX基因丢失 | 第100-102页 |
| ·质粒pSH47/hphB的丢失 | 第102页 |
| ·SPT15-300重组菌的构建 | 第102-104页 |
| ·点突变等位基因SPT15-300 | 第102-103页 |
| ·LFH-PCR SPT15-300-KanMX基因组整合元件的获得 | 第103-104页 |
| ·LFH-PCR电转化及重组菌构建 | 第104页 |
| ·细胞表型检测 | 第104-105页 |
| ·本章小结 | 第105-106页 |
| 第五章 啤酒酵母SPT15-300突变株的发酵研究 | 第106-120页 |
| ·实验材料 | 第106-107页 |
| ·实验菌株 | 第106页 |
| ·培养基 | 第106-107页 |
| ·实验方法 | 第107-109页 |
| ·细胞生长曲线 | 第107页 |
| ·短期定向驯化 | 第107-108页 |
| ·细胞表型生长比较 | 第108页 |
| ·发酵实验 | 第108页 |
| ·以葡萄糖为底物的发酵 | 第108页 |
| ·以麦芽糖葡萄糖混合糖为底物共发酵 | 第108页 |
| ·高效液相色谱法(HPLC)测定残糖和产物乙醇 | 第108-109页 |
| ·结果与讨论 | 第109-118页 |
| ·细胞生长曲线测定 | 第109-110页 |
| ·SPT15-300与SPT15的葡萄糖发酵 | 第110-114页 |
| ·中密度葡萄糖发酵 | 第110-112页 |
| ·高密度葡萄糖发酵 | 第112-114页 |
| ·模拟啤酒发酵过程麦芽糖和葡萄糖混合低温发酵 | 第114-115页 |
| ·短期驯化株的表型比较 | 第115-116页 |
| ·SPT15-300与QA在30%葡萄糖发酵比较 | 第116-118页 |
| ·讨论 | 第118页 |
| ·本章小结 | 第118-120页 |
| 全文总结 | 第120-122页 |
| 参考文献 | 第122-128页 |
| 致谢 | 第128-130页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第130-131页 |
| 附录 | 第131-155页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第155页 |
