| 中文摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 符号说明及缩写词 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-30页 |
| ·Ca~(2+)在细菌生命活动中的作用 | 第16-20页 |
| ·Ca~(2+)对细菌生理的影响 | 第16-18页 |
| ·细菌胞内Ca~(2+)水平的调控 | 第18-20页 |
| ·Ca~(2+)在粘细菌中的作用 | 第20-23页 |
| ·粘细菌简介 | 第20-21页 |
| ·Ca~(2+)在粘细菌分化发育中的作用 | 第21-23页 |
| ·细菌胞内游离钙离子浓度的测定 | 第23-26页 |
| ·钙荧光染料法 | 第23-24页 |
| ·钙荧光蛋白法 | 第24-26页 |
| ·细菌中的钙结合蛋白 | 第26-29页 |
| ·论文工作开展思路及研究内容 | 第29-30页 |
| 第二章 粘球菌DK1622胞内游离钙离子浓度的测定 | 第30-64页 |
| ·实验材料 | 第30-36页 |
| ·菌株及质粒 | 第30-31页 |
| ·培养基 | 第31-32页 |
| ·实验试剂 | 第32-34页 |
| ·各种所需溶液的配制 | 第32-34页 |
| ·常用试剂盒、试剂的购置 | 第34页 |
| ·仪器设备与耗材 | 第34-35页 |
| ·数据库及分析软件 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-53页 |
| ·质粒载体的构建 | 第36-44页 |
| ·黄色粘球菌DK1622染色体DNA的提取 | 第36页 |
| ·相关序列的克隆及处理 | 第36-39页 |
| ·质粒载体的酶切、连接及转化 | 第39-41页 |
| ·质粒载体构建流程图 | 第41-44页 |
| ·黄色粘球菌DK1622的电转化及转化子的筛选、纯化 | 第44-46页 |
| ·黄色粘球菌DK1622的电转化 | 第44-45页 |
| ·转化子的筛选及纯化 | 第45页 |
| ·粘球菌菌落PCR | 第45-46页 |
| ·粘细菌质粒提取 | 第46页 |
| ·转化子的保存 | 第46-47页 |
| ·E.coli胞内游离钙离子浓度的测定 | 第47-50页 |
| ·异源蛋白的诱导表达 | 第47页 |
| ·SDS-PAGE检测目的蛋白的表达 | 第47-49页 |
| ·obelin在BL21(DE3)中的装配 | 第49页 |
| ·E.coli中obelin的荧光观察 | 第49页 |
| ·E.coli中obelin荧光强度扫描及[Ca~(2+)]_i计算 | 第49-50页 |
| ·粘球菌DK1622胞内游离钙离子浓度的测定 | 第50-53页 |
| ·质粒载体电转化粘球菌DK1622及转化子的筛选 | 第50页 |
| ·SDS-PAGE检测obelin在粘球菌DK1622中的表达 | 第50-51页 |
| ·反转录PCR(RT-PCR)检测obelin在DK1622中的表达 | 第51-53页 |
| ·obelin在粘球菌DK1622中的装配 | 第53页 |
| ·DK1622中obelin的荧光观察 | 第53页 |
| ·DK1622中obelin荧光强度扫描及[Ca~(2+)]_i计算 | 第53页 |
| ·实验结果与讨论 | 第53-62页 |
| ·E.coli胞内游离钙离子浓度的测定 | 第53-57页 |
| ·pET15b-obe、pET22b-obe表达载体的构建 | 第54页 |
| ·SDS-PAGE检测obelin在E.coli中的表达 | 第54-55页 |
| ·荧光显微镜观察obelin在E.coli中的荧光 | 第55-57页 |
| ·DK1622胞内游离钙离子浓度的测定 | 第57-62页 |
| ·pZJY41-obe、pSWU30-obe载体的构建 | 第57页 |
| ·DK obe Int、DK obe Ex转化子的获得 | 第57-58页 |
| ·RT-PCR检测obelin在DK1622中的表达 | 第58-59页 |
| ·SDS-PAGE检测obelin在DK1622中的表达 | 第59-60页 |
| ·荧光显微镜观察obelin在DK1622中的荧光 | 第60-62页 |
| ·本章小结 | 第62-64页 |
| 第三章 粘球菌DK1622钙结合蛋白基因的预测 | 第64-86页 |
| ·实验材料 | 第64-66页 |
| ·菌株及质粒 | 第64-65页 |
| ·培养基 | 第65页 |
| ·实验试剂与仪器设备 | 第65-66页 |
| ·数据库及分析软件 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-75页 |
| ·DK1622基因组序列分析 | 第66-67页 |
| ·表达载体的构建 | 第67-72页 |
| ·相关序列的克隆及处理 | 第67-69页 |
| ·质粒载体构建流程图 | 第69-72页 |
| ·DK1622基因敲除突变株的筛选及纯化 | 第72-73页 |
| ·DK1622基因敲除突变株发育能力及运动能力的分析 | 第73页 |
| ·目的蛋白的诱导表达及检测 | 第73页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第73-74页 |
| ·包涵体蛋白的纯化 | 第73-74页 |
| ·可溶性蛋白的纯化 | 第74页 |
| ·CaBPs的鉴定 | 第74-75页 |
| ·实验结果与讨论 | 第75-85页 |
| ·DK1622基因组序列的分析 | 第75-80页 |
| ·表达载体的构建 | 第80-82页 |
| ·E.coli中异源表达DK1622基因表达载体的构建 | 第80-82页 |
| ·基因敲除载体的构建 | 第82页 |
| ·基因敲除突变株的筛选 | 第82-83页 |
| ·基因敲除突变株发育及运动能力分析 | 第83-84页 |
| ·E.coli中异源表达DK1622中可能的CaBPs | 第84-85页 |
| ·本章小结 | 第85-86页 |
| 总结与展望 | 第86-88页 |
| 附录 | 第88-92页 |
| 参考文献 | 第92-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第101页 |
