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农杆菌介导的蚕豆铁蛋白基因水稻转化及其功能研究

中文摘要第1-9页
第一篇 文献综述第9-23页
 前言第9页
 1. 植物铁蛋白概述第9-14页
  1.1 铁的营养效应第9-11页
  1.2 铁蛋白的结构第11页
  1.3 植物中的铁蛋白基因及其表达调控第11-13页
  1.4 铁离子与活性氧的产生第13页
  1.5 铁蛋白的抗氧化作用第13-14页
 2. 活性氧的产生与功能第14-17页
  2.1 活性氧的产生第14-15页
  2.2 活性氧的功能第15-16页
  2.3 活性氧的清除第16-17页
 3 植物抗病基因工程研究进展第17-19页
  3.1 利用植物的R基因第17-18页
  3.2 病原体无毒基因第18页
  3.3 利用外源种质抗病相关基因第18页
  3.4 利用植物本身的内源抗病相关基因第18-19页
  3.5 植物内在抗病机制的直接应用第19页
 4. 根癌农杆菌介导的基因转化第19-23页
  4.1 植物遗传转化方法第19-20页
  4.2 农杆菌介导外源基因转化植物的机理第20-21页
  4.3 农杆菌介导的水稻转化研究第21-23页
第二篇 研究报告第23-55页
 第1章 Pea ferritin基因植物转化系统的构建第23-35页
  1.1 材料与试剂第23页
   1.1.1 菌株第23页
   1.1.2 植物表达载体质粒第23页
   1.1.3 常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器第23页
   1.1.4 常用缓冲液、抗生素及培养基配方第23页
  1.2 方法第23-32页
   1.2.1 本研究中常见的几种分子生物学实验方法第23-26页
   1.2.2 Pea ferritin的水稻转化载体构建第26-32页
    1.2.2.1 技术路线第26页
    1.2.2.2 载体pCam35S的构建第26-30页
    1.2.2.3 植物表达载体pCam35Sfer(+)的构建第30-31页
    1.2.2.4 pCam35Sfer(+)载体的农杆菌转化第31-32页
  1.3 结果与分析第32-35页
   1.3.1 pCam35Sfer载体的酶切鉴定第32-34页
   1.3.2 pCam35Sfer(+)表达载体的农杆菌转化与PCR鉴定第34页
   1.3.3 农杆菌的检测第34-35页
 第2章 农杆菌介导的铁蛋白(ferritin)基因转化水稻第35-47页
  2.1 材料第35页
  2.2 方法第35-41页
   2.2.1 根癌农杆菌介导的铁蛋白基因的水稻转化第35-36页
   2.2.2 转基因植株的分子鉴定第36-41页
    2.2.2.1 水稻基因组DNA的提取第36-37页
    2.2.2.2 PCR反应鉴定第37页
    2.2.2.3 Southern杂交分析第37-40页
    2.2.2.4 Northern杂交分析第40-41页
  2.3 结果与分析第41-45页
   2.3.1 水稻的转化第41-45页
    2.3.1.1 水稻胚性愈伤组织培养第41页
    2.3.1.2 转基因苗的获得第41-42页
    2.3.1.3 转化效率分析第42-43页
    2.3.1.4 PCR鉴定结果第43-44页
    2.3.1.5 转基因植株的Southern杂交分析第44页
    2.3.1.6 转基因植株的Northern杂交分析第44-45页
  2.4 讨论第45-47页
 第3章 转ferritin基因水稻对病原菌侵染的耐受性研究第47-51页
  3.1 材料第47页
  3.2 方法第47-48页
   3.2.1 转基因水稻叶片接种试验第47-48页
    3.2.1.1 白叶枯病菌接种第47页
    3.2.1.2 稻瘟病菌接种第47页
    3.2.1.3 活性氧的检测第47-48页
  3.3 结果与分析第48-49页
   3.3.1 接种病原菌后转基因水稻叶片DAB染色结果第48-49页
  3.4 讨论第49-51页
 第4章 转基因水稻铁含量的测定第51-55页
  4.1 材料第51页
  4.2 方法第51-52页
   4.2.1 样品处理第51页
   4.2.2 样品的测定第51-52页
  4.3 结果与分析第52-53页
  4.4 讨论第53-55页
小 结第55-56页
参考文献第56-62页
附录A 本研究所用的质粒图谱第62-63页
附录B 主要化学药品、分子生物学试剂及仪器第63-64页
附录C 培养基、主要试剂和缓冲液配方第64-70页
附录D 缩略词表第70-71页
致谢第71页

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