中文摘要 | 第1-9页 |
第一篇 文献综述 | 第9-23页 |
前言 | 第9页 |
1. 植物铁蛋白概述 | 第9-14页 |
1.1 铁的营养效应 | 第9-11页 |
1.2 铁蛋白的结构 | 第11页 |
1.3 植物中的铁蛋白基因及其表达调控 | 第11-13页 |
1.4 铁离子与活性氧的产生 | 第13页 |
1.5 铁蛋白的抗氧化作用 | 第13-14页 |
2. 活性氧的产生与功能 | 第14-17页 |
2.1 活性氧的产生 | 第14-15页 |
2.2 活性氧的功能 | 第15-16页 |
2.3 活性氧的清除 | 第16-17页 |
3 植物抗病基因工程研究进展 | 第17-19页 |
3.1 利用植物的R基因 | 第17-18页 |
3.2 病原体无毒基因 | 第18页 |
3.3 利用外源种质抗病相关基因 | 第18页 |
3.4 利用植物本身的内源抗病相关基因 | 第18-19页 |
3.5 植物内在抗病机制的直接应用 | 第19页 |
4. 根癌农杆菌介导的基因转化 | 第19-23页 |
4.1 植物遗传转化方法 | 第19-20页 |
4.2 农杆菌介导外源基因转化植物的机理 | 第20-21页 |
4.3 农杆菌介导的水稻转化研究 | 第21-23页 |
第二篇 研究报告 | 第23-55页 |
第1章 Pea ferritin基因植物转化系统的构建 | 第23-35页 |
1.1 材料与试剂 | 第23页 |
1.1.1 菌株 | 第23页 |
1.1.2 植物表达载体质粒 | 第23页 |
1.1.3 常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第23页 |
1.1.4 常用缓冲液、抗生素及培养基配方 | 第23页 |
1.2 方法 | 第23-32页 |
1.2.1 本研究中常见的几种分子生物学实验方法 | 第23-26页 |
1.2.2 Pea ferritin的水稻转化载体构建 | 第26-32页 |
1.2.2.1 技术路线 | 第26页 |
1.2.2.2 载体pCam35S的构建 | 第26-30页 |
1.2.2.3 植物表达载体pCam35Sfer(+)的构建 | 第30-31页 |
1.2.2.4 pCam35Sfer(+)载体的农杆菌转化 | 第31-32页 |
1.3 结果与分析 | 第32-35页 |
1.3.1 pCam35Sfer载体的酶切鉴定 | 第32-34页 |
1.3.2 pCam35Sfer(+)表达载体的农杆菌转化与PCR鉴定 | 第34页 |
1.3.3 农杆菌的检测 | 第34-35页 |
第2章 农杆菌介导的铁蛋白(ferritin)基因转化水稻 | 第35-47页 |
2.1 材料 | 第35页 |
2.2 方法 | 第35-41页 |
2.2.1 根癌农杆菌介导的铁蛋白基因的水稻转化 | 第35-36页 |
2.2.2 转基因植株的分子鉴定 | 第36-41页 |
2.2.2.1 水稻基因组DNA的提取 | 第36-37页 |
2.2.2.2 PCR反应鉴定 | 第37页 |
2.2.2.3 Southern杂交分析 | 第37-40页 |
2.2.2.4 Northern杂交分析 | 第40-41页 |
2.3 结果与分析 | 第41-45页 |
2.3.1 水稻的转化 | 第41-45页 |
2.3.1.1 水稻胚性愈伤组织培养 | 第41页 |
2.3.1.2 转基因苗的获得 | 第41-42页 |
2.3.1.3 转化效率分析 | 第42-43页 |
2.3.1.4 PCR鉴定结果 | 第43-44页 |
2.3.1.5 转基因植株的Southern杂交分析 | 第44页 |
2.3.1.6 转基因植株的Northern杂交分析 | 第44-45页 |
2.4 讨论 | 第45-47页 |
第3章 转ferritin基因水稻对病原菌侵染的耐受性研究 | 第47-51页 |
3.1 材料 | 第47页 |
3.2 方法 | 第47-48页 |
3.2.1 转基因水稻叶片接种试验 | 第47-48页 |
3.2.1.1 白叶枯病菌接种 | 第47页 |
3.2.1.2 稻瘟病菌接种 | 第47页 |
3.2.1.3 活性氧的检测 | 第47-48页 |
3.3 结果与分析 | 第48-49页 |
3.3.1 接种病原菌后转基因水稻叶片DAB染色结果 | 第48-49页 |
3.4 讨论 | 第49-51页 |
第4章 转基因水稻铁含量的测定 | 第51-55页 |
4.1 材料 | 第51页 |
4.2 方法 | 第51-52页 |
4.2.1 样品处理 | 第51页 |
4.2.2 样品的测定 | 第51-52页 |
4.3 结果与分析 | 第52-53页 |
4.4 讨论 | 第53-55页 |
小 结 | 第55-56页 |
参考文献 | 第56-62页 |
附录A 本研究所用的质粒图谱 | 第62-63页 |
附录B 主要化学药品、分子生物学试剂及仪器 | 第63-64页 |
附录C 培养基、主要试剂和缓冲液配方 | 第64-70页 |
附录D 缩略词表 | 第70-71页 |
致谢 | 第71页 |