| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 资源家系测定性状的英文缩写 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.前言 | 第13页 |
| 2.影响脂肪代谢的重要候选基因 | 第13-15页 |
| 3.拟分离基因的研究现状 | 第15-17页 |
| ·胰脂肪酶基因家族概述 | 第15-16页 |
| ·PNLIPRP2基因的研究现状 | 第16页 |
| ·PNLIPRP2基因与脂肪代谢 | 第16-17页 |
| 4.基于EST的新基因克隆策略 | 第17-18页 |
| ·EST的概念及技术原理 | 第17页 |
| ·基因的电子克隆 | 第17-18页 |
| 5.单核苷酸多态概述 | 第18-19页 |
| ·SNPs的概念 | 第18页 |
| ·猪分子育种中SNPs常用的检测方法 | 第18-19页 |
| 6.启动子的研究方法 | 第19-22页 |
| ·启动子克隆方法 | 第19-20页 |
| ·本研究采用的启动子扩增方法 | 第20-21页 |
| ·启动子结构和功能的研究方法 | 第21-22页 |
| 第二章 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第三章 材料与方法 | 第23-40页 |
| 1.试验材料 | 第23-26页 |
| ·试验样品和性状测定 | 第23页 |
| ·DNA样品 | 第23页 |
| ·组织样品 | 第23页 |
| ·性状测定 | 第23页 |
| ·主要仪器和设备 | 第23-24页 |
| ·载体和菌株 | 第24-25页 |
| ·主要药品及试剂 | 第25页 |
| ·主要试剂的配制 | 第25-26页 |
| 2.试验方法 | 第26-40页 |
| ·猪基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·基因组DNA的浓度测定和质量检测 | 第27页 |
| ·猪PNLIPRP2基因cDNA序列的克隆、测序 | 第27-30页 |
| ·引物设计及合成 | 第27-28页 |
| ·猪个组织总RNA的提取及cDNA的制备 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的回收、纯化和克隆测序 | 第29-30页 |
| ·常用的分子生物学软件 | 第30-31页 |
| ·猪PNLIPRP2基因基因组序列的克隆测序 | 第31-33页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·PCR反应体系及条件 | 第31-32页 |
| ·基因多态性扫描和遗传方式分析 | 第32页 |
| ·多态性与性状的关联分析方法 | 第32-33页 |
| ·猪PNLIPRP2基因组织表达谱研究 | 第33页 |
| ·总RNA的提取及RNA浓度与质量的检测 | 第33页 |
| ·RT-PCR扩增体系 | 第33页 |
| ·猪PNLIPRP2蛋白保守结构域的原核表达 | 第33-36页 |
| ·猪PNLIPRP2蛋白保守结构域原核表达载体的构建 | 第33-35页 |
| ·诱导表达 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第35-36页 |
| ·猪PNLIPRP2基因启动子的研究 | 第36-40页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第36-37页 |
| ·基因组步移库的构建 | 第37-38页 |
| ·基因组PCR步移 | 第38-39页 |
| ·步移产物的回收和克隆 | 第39-40页 |
| 第四章 结果与分析 | 第40-57页 |
| 1.猪PNLIPRP2基因cDNA序列的分离与克隆测序结果 | 第40-43页 |
| ·总RNA的提取与质量检测结果 | 第40页 |
| ·猪PNLIPRP2基因cDNA扩增结果 | 第40-41页 |
| ·猪PNLIPRP2基因cDNA序列的生物信息学分析 | 第41-43页 |
| 2.猪PNLIPRP2基因部分基因组序列的克隆 | 第43-44页 |
| 3.猪PNLIPRP2基因的SNPs研究 | 第44-48页 |
| ·猪PNLIPRP2基因的SNPs检测 | 第44-45页 |
| ·不同猪种中基因型频率的检测结果 | 第45-46页 |
| ·猪PNLIPRP2基因Ecol30Ⅰ—RFLP基因型与性状的统计分析 | 第46-48页 |
| 4.猪PNLIPRP2基因的半定量组织表达谱分析 | 第48-49页 |
| 5.猪PNLIPRP2蛋白保守结构域的原核表达结果 | 第49-52页 |
| ·猪PNLIPRP2蛋白保守结构域PLAT_PL的扩增结果 | 第49-50页 |
| ·猪PNLIPRP2蛋白保守结构域原核表达载体的构建 | 第50页 |
| ·重组原核表达载体的鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组子的菌液PCR鉴定结果 | 第50页 |
| ·重组子的酶切鉴定结果 | 第50-51页 |
| ·重组子中插入片断的测序鉴定结果 | 第51页 |
| ·IPTG诱导重组原核表达载体表达PLAT_PL蛋白 | 第51-52页 |
| 6.猪PNLIPRP2基因启动子的克隆及生物信息学分析 | 第52-57页 |
| ·基因组步移库的构建 | 第52页 |
| ·猪PNLIPRP2基因启动子的获得 | 第52-54页 |
| ·生物信息学预测PNLIPRP2核心启动子区及转录因子结合位点 | 第54-57页 |
| 第五章 讨论 | 第57-62页 |
| 1.关于候选基因的选择 | 第57页 |
| 2.关于猪PNLIPRP2基因结构的分析 | 第57-58页 |
| 3.关于基因的组织表达谱分析 | 第58-59页 |
| 4.关于基因的SNPs检测及性状的关联分析 | 第59-60页 |
| ·基因的SNPs检测 | 第59页 |
| ·性状关联分析 | 第59-60页 |
| 5.关于启动子序列的克隆及分析 | 第60-62页 |
| ·关于启动子序列的克隆 | 第60页 |
| ·关于启动子序列的生物信息学分析 | 第60-62页 |
| 第六章 小结 | 第62-63页 |
| 1.本研究获得的结果及创新点 | 第62页 |
| 2.下一步工作 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
