| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-63页 |
| ·植物类黄酮次生代谢及其生物工程研究进展 | 第16-44页 |
| ·类黄酮的基本结构及分类 | 第16-18页 |
| ·类黄酮的生物学功能 | 第18-27页 |
| ·类黄酮次生代谢的基本途径 | 第27-40页 |
| ·类黄酮次生代谢调控及生物工程研究进展 | 第40-43页 |
| ·展望 | 第43-44页 |
| ·金荞麦研究进展 | 第44-63页 |
| ·种属关系 | 第45-47页 |
| ·植物分类及分布 | 第47-49页 |
| ·遗传分析 | 第49-50页 |
| ·化学及功能成分 | 第50-52页 |
| ·药效学研究 | 第52-58页 |
| ·生态环境 | 第58页 |
| ·栽培及组织培养 | 第58-60页 |
| ·展望 | 第60-63页 |
| 第2章 引言 | 第63-65页 |
| ·研究背景 | 第63页 |
| ·研究的意义及目的 | 第63-64页 |
| ·技术路线 | 第64-65页 |
| 第3章 金荞麦高黄酮含量愈伤系的获得 | 第65-73页 |
| ·技术路线 | 第65页 |
| ·材料 | 第65-66页 |
| ·植物材料 | 第65-66页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第66页 |
| ·培养基与培养条件 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-67页 |
| ·野生金荞麦种子的采集 | 第66页 |
| ·金荞麦无菌苗的获得 | 第66页 |
| ·金荞麦茎与叶片愈伤组织的诱导 | 第66页 |
| ·高黄酮含量愈伤组织的目视法筛选 | 第66页 |
| ·高黄酮含量愈伤组织的分光光度法筛选 | 第66-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-70页 |
| ·金荞麦无菌苗的获得 | 第67-68页 |
| ·愈伤组织的诱导 | 第68-69页 |
| ·高黄酮含量愈伤组织的筛选 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| ·愈伤组织的诱导 | 第70-71页 |
| ·致密的愈伤组织与次生代谢产物的累积 | 第71页 |
| ·高黄酮含量愈伤系的筛选 | 第71页 |
| ·小结 | 第71-73页 |
| 第4章 金荞麦愈伤系CDNA文库的构建 | 第73-87页 |
| ·技术路线 | 第73页 |
| ·材料与试剂 | 第73-75页 |
| ·植物材料 | 第73页 |
| ·菌株与载体 | 第73-74页 |
| ·主要试剂 | 第74页 |
| ·主要仪器设备 | 第74页 |
| ·自配的主要试剂 | 第74-75页 |
| ·方法 | 第75-82页 |
| ·金荞麦红色愈伤系总RNA的提取——改良CTAB法 | 第75页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测RNA | 第75-76页 |
| ·紫外分光光度法测定RNA | 第76页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第76页 |
| ·LD-PCR(Long Distance PCR)扩增第一链cDNA合成双链cDNA | 第76-77页 |
| ·cDNA的蛋白酶K处理 | 第77页 |
| ·cDNA的SfiI酶切 | 第77-78页 |
| ·CHROMA SPIN-400对cDNA进行分级分离 | 第78页 |
| ·全长cDNA的沉淀浓缩 | 第78-79页 |
| ·cDNA与载体λTriplEx2连接 | 第79页 |
| ·连接产物—重组λ载体的包装 | 第79页 |
| ·cDNA文库的质量检测 | 第79-82页 |
| ·结果与分析 | 第82-85页 |
| ·总RNA的提取 | 第82页 |
| ·cDNA第一链合成及LD-PCR | 第82-83页 |
| ·CHROMA SPIN-400对cDNA分级分离 | 第83页 |
| ·cDNA文库的质量评价 | 第83-85页 |
| ·讨论 | 第85-86页 |
| ·愈伤组织RNA提取 | 第85页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第85-86页 |
| ·小结 | 第86-87页 |
| 第5章 FCDFR基因的克隆与功能初步分析 | 第87-128页 |
| ·技术路线 | 第87-88页 |
| ·材料和试剂 | 第88-90页 |
| ·植物材料 | 第88页 |
| ·金荞麦cDNA文库 | 第88页 |
| ·菌株与载体 | 第88页 |
| ·主要化学试剂 | 第88页 |
| ·主要仪器设备 | 第88-89页 |
| ·自配的主要试剂 | 第89-90页 |
| ·烟草转化基本培养基 | 第90页 |
| ·GUS染液 | 第90页 |
| ·方法 | 第90-103页 |
| ·材料总RNA的提取和反转录 | 第90-91页 |
| ·同源基因片断的克隆 | 第91页 |
| ·RACE和文库结合的方法分离FcDFR全长cDNA基因 | 第91-92页 |
| ·FcDFR基因DNA序列的获得及基因结构分析 | 第92-99页 |
| ·FcDFR基因的生物信息学分析 | 第99页 |
| ·金荞麦FcDFR植物表达载体构建 | 第99-100页 |
| ·FcDFR基因导入烟草及转化植株的获得 | 第100-101页 |
| ·转基因烟草的检测和类黄酮测定 | 第101-102页 |
| ·转基因烟草类黄酮含量测定 | 第102-103页 |
| ·结果与分析 | 第103-121页 |
| ·FcDFR cDNA全长基因的克隆 | 第103-104页 |
| ·FcDFR DNA序列的分离及拷贝数分析 | 第104-107页 |
| ·金荞麦FcDFR基因的cDNA序列结构特征 | 第107-109页 |
| ·金荞麦FcDFR基因编码蛋白同源性 | 第109-112页 |
| ·金荞麦FcDFR基因编码蛋白性质与结构分析 | 第112-117页 |
| ·金荞麦FcDFR基因植物表达载体的构建 | 第117-118页 |
| ·转金荞麦FcDFR基因烟草的获得和检测 | 第118-121页 |
| ·转基因烟草类黄酮含量测定及分析 | 第121页 |
| ·讨论 | 第121-126页 |
| ·文库筛选方法 | 第121-122页 |
| ·FcDFR基因特征 | 第122-123页 |
| ·生物信息学分析的必要性 | 第123页 |
| ·FcDFR蛋白的亚细胞定位 | 第123-124页 |
| ·FcDFR蛋白的底物特异性 | 第124-126页 |
| ·转基因烟草类黄酮含量与表达的关系 | 第126页 |
| ·小结 | 第126页 |
| ·下一步的工作 | 第126-128页 |
| 第6章 FCMYBP1基因的克隆与功能初步分析 | 第128-151页 |
| ·技术路线 | 第128-129页 |
| ·材料材料和试剂 | 第129页 |
| ·方法 | 第129-130页 |
| ·材料总RNA的提取和反转录 | 第129页 |
| ·同源基因片断的克隆 | 第129页 |
| ·RACE和文库结合的方法分离FcMYBP1全长cDNA基因 | 第129页 |
| ·FcMYBP1基因DNA序列的获得及基因结构分析 | 第129-130页 |
| ·FcMYBP1基因cDNA的生物信息学分析 | 第130页 |
| ·金荞麦FcMYBP1植物表达载体构建 | 第130页 |
| ·结果与分析 | 第130-147页 |
| ·金荞麦FcMYBP1基因的克隆 | 第130-132页 |
| ·FcMYBP1 DNA序列的分离及拷贝数分析 | 第132-133页 |
| ·金荞麦FcMYBP1基因的核苷酸序列结构特征 | 第133-134页 |
| ·金荞麦FcMYBP1基因编码推测蛋白质分析 | 第134-142页 |
| ·金荞麦FcMYBP1基因植物表达载体的构建 | 第142-144页 |
| ·转金荞麦FcMYBP1基因烟草的获得和检测 | 第144-146页 |
| ·转基因烟草类黄酮含量测定及分析 | 第146-147页 |
| ·讨论 | 第147-149页 |
| ·FcMYBP1基因结构和功能的关系 | 第147-148页 |
| ·类黄酮代谢途径调控的复杂性 | 第148-149页 |
| ·小结 | 第149页 |
| ·下一步的工作 | 第149-151页 |
| 第7章 总结 | 第151-153页 |
| ·主要结论 | 第151-152页 |
| ·主要创新点 | 第152页 |
| ·本论文主要不足 | 第152页 |
| ·进一步研究设想 | 第152-153页 |
| 参考文献 | 第153-171页 |
| 附录 | 第171-172页 |
| 附录1 缩略词 | 第171-172页 |
| 致谢 | 第172-173页 |
| 发表论文及参加课题一览表 | 第173-174页 |
