| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-21页 |
| ·RGDV分布和症状 | 第9页 |
| ·传毒介体及传毒特性 | 第9-10页 |
| ·水稻瘤矮病的发病规律与防治措施 | 第10-11页 |
| ·水稻瘤矮病的发病规律 | 第10页 |
| ·水稻瘤矮病的防治措施 | 第10-11页 |
| ·基因组结构与功能 | 第11-17页 |
| ·RGDV粒体形态与特性 | 第11-13页 |
| ·基因组结构与功能 | 第13-17页 |
| ·杆状病毒表达系统研究概况 | 第17-19页 |
| ·昆虫杆状病毒表达系统的研究和应用进展 | 第17-18页 |
| ·杆状病毒表达系统的原理及特点 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-34页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·供试病毒 | 第21页 |
| ·试剂和酶类 | 第21页 |
| ·载体和菌株 | 第21页 |
| ·实验仪器 | 第21-23页 |
| ·实验方法 | 第23-34页 |
| ·RGDV双链RNA的抽提与纯化及定量 | 第23页 |
| ·RGDV-dsRNA的提取与纯化 | 第23页 |
| ·dsRNA的定量 | 第23页 |
| ·P8和PNS10基因的扩增 | 第23-25页 |
| ·引物设计与合成 | 第23-24页 |
| ·cDNA合成 | 第24页 |
| ·PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·PCR产物纯化 | 第25页 |
| ·DNA克隆技术 | 第25-26页 |
| ·目的片段与pMD18-T Vector的连接反应 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的简易制备(CaCl_2法) | 第26页 |
| ·连接反应物对宿主感受态细胞的转化 | 第26页 |
| ·重组克隆的PCR筛选 | 第26-27页 |
| ·质粒的少量提纯(碱法) | 第27-28页 |
| ·碱裂解法小量制备质粒DNA | 第27页 |
| ·P8和PNS10重组质粒的酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组杆状病毒表达载体的构建 | 第28页 |
| ·供体质粒的构建 | 第28页 |
| ·序列测定 | 第28页 |
| ·重组杆粒的获得与鉴定 | 第28-30页 |
| ·DH10BAC感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·转化 | 第29页 |
| ·阳性重组子RGDV-P8-bacmid和RGDV-P10-bacmid杆粒的抽提 | 第29-30页 |
| ·昆虫细胞的培养 | 第30-31页 |
| ·Grace’s培养基的配制 | 第30页 |
| ·细胞的复苏和传代 | 第30页 |
| ·sf9细胞的冻存 | 第30页 |
| ·血细胞计数板计数 | 第30-31页 |
| ·sf9细胞的培养 | 第31页 |
| ·重组BACMID DNA转染SF9细胞及重组病毒的收获 | 第31页 |
| ·扩毒 | 第31页 |
| ·重组病毒的PCR鉴定 | 第31页 |
| ·目的蛋白的表达和表达产物的鉴定 | 第31-34页 |
| ·感染 | 第32页 |
| ·细胞收集 | 第32页 |
| ·细胞裂解 | 第32页 |
| ·蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第32页 |
| ·蛋白的western-blot鉴定 | 第32-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-51页 |
| ·RGDV-DSRNA的提取及纯化 | 第34页 |
| ·目的基因的克隆 | 第34-37页 |
| ·基因组P8片段的PCR扩增及克隆 | 第34-36页 |
| ·基因组PNS10片段的PCR扩增及克隆 | 第36-37页 |
| ·重组转座载体的构建 | 第37-39页 |
| ·重组转座载体的酶切分析 | 第39页 |
| ·序列测定与分析 | 第39-40页 |
| ·重组杆状病毒BAC-HTB的鉴定 | 第40-41页 |
| ·转移载体杆粒制备 | 第41页 |
| ·Sf9昆虫细胞生长曲线测定和培养 | 第41-43页 |
| ·正常Sf9细胞形态和Bac-HTb转染后Sf9细胞的形态变化 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第44-48页 |
| ·重组蛋白的WESTERN-BLOT分析 | 第48-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| ·杆状病毒表达系统 | 第51-52页 |
| ·Sf9昆虫细胞的培养 | 第52页 |
| ·HCV结构蛋白的表达 | 第52页 |
| ·蛋白收获的时间 | 第52-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
