| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-27页 |
| 1 联苯及其衍生化合物 | 第14-18页 |
| ·芳香族化合物概述 | 第14页 |
| ·联苯及其衍生物概况 | 第14-16页 |
| ·联苯及其衍生物的危害及治理 | 第16-18页 |
| 2 联苯及多氯联苯的生物降解 | 第18-21页 |
| ·联苯的生物降解 | 第18-19页 |
| ·多氯联苯的生物降解 | 第19页 |
| ·联苯及多氯联苯降解的上游酶系 | 第19-21页 |
| 3 HOPDA | 第21-22页 |
| ·HOPDA的产生和积累 | 第21页 |
| ·HOPDA的生物转化工程 | 第21-22页 |
| 4 本论文研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 参考文献 | 第23-27页 |
| 第二章 联苯水解酶基因的克隆,表达和纯化 | 第27-36页 |
| 1 材料 | 第27-28页 |
| ·菌株和载体 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·主要的酶和化学试剂 | 第28页 |
| ·主要的仪器设备 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28-32页 |
| ·Rhodococcus sp.R04水解酶基因bphD的克隆 | 第28页 |
| ·联苯水解酶的表达 | 第28-30页 |
| ·联苯水解酶的纯化 | 第30-31页 |
| ·酶活性分析及蛋白含量测定 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-33页 |
| ·Rhodococcus sp.R04水解酶基因bphD的扩增及重组子鉴定 | 第32页 |
| ·联苯水解酶的表达及纯化 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-36页 |
| 第三章 联苯水解酶的部分性质研究 | 第36-47页 |
| 1 材料 | 第36-37页 |
| ·主要的化学试剂 | 第36页 |
| ·主要的仪器设备 | 第36-37页 |
| 2 方法 | 第37-39页 |
| ·最适pH和最适温度测定 | 第37页 |
| ·pH稳定性和热稳定性测定 | 第37-38页 |
| ·圆二色性分析 | 第38页 |
| ·天然分子量的测定 | 第38页 |
| ·金属离子、表面活性剂和抑制剂对BphD酶活性的影响 | 第38页 |
| ·动力学参数的测定 | 第38-39页 |
| 3 结果 | 第39-43页 |
| ·BphD最适温度和最适pH | 第39页 |
| ·BphD的pH稳定性 | 第39页 |
| ·BphD的热稳定性 | 第39-40页 |
| ·BphD的圆二色性 | 第40-41页 |
| ·BphD的天然分子量 | 第41-42页 |
| ·金属离子、表面活性剂和抑制剂对BphD活性的影响 | 第42页 |
| ·BphD的动力学参数 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 第四章 联苯水解酶的催化活性氨基酸分析及定点突变研究 | 第47-57页 |
| 1 材料 | 第47-48页 |
| ·主要的酶和化学试剂 | 第47-48页 |
| ·主要仪器设备 | 第48页 |
| 2 方法 | 第48-51页 |
| ·Rhodococcus sp.R04 BphD与其同源水解酶的氨基酸系列比对 | 第48页 |
| ·Rhodococcus sp.R04 BphD的化学修饰 | 第48页 |
| ·联苯水解酶的定点突变 | 第48-50页 |
| ·突变体重组质粒的构建 | 第50页 |
| ·BphD突变体的表达 | 第50-51页 |
| 3 结果 | 第51-54页 |
| ·水解酶一级结构序列比对 | 第51页 |
| ·BphD的化学修饰 | 第51-53页 |
| ·BphD的定点突变及突变体的表达 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 第五章 联苯水解酶反应动力学研究 | 第57-69页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| ·菌株来源 | 第58页 |
| ·试剂与仪器 | 第58页 |
| ·培养基 | 第58-59页 |
| 2 方法 | 第59-60页 |
| ·2,3-二羟基联苯双加氧酶的制备 | 第59页 |
| ·联苯水解酶的制备 | 第59页 |
| ·BphD稳态动力学数据测定 | 第59页 |
| ·BphD的底物特异性分析 | 第59-60页 |
| ·BphD非稳态动力学研究 | 第60页 |
| 3 结果与讨论 | 第60-66页 |
| ·BphD稳态动力学分析 | 第60-63页 |
| ·BphD非稳态动力学分析 | 第63-66页 |
| 4 展望 | 第66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 小结 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 个人简况及联系方式 | 第72-74页 |
