| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-23页 |
| ·丙氨酸消旋酶 | 第17-21页 |
| ·丙氨酸消旋酶的分布 | 第17页 |
| ·丙氨酸消旋酶的结构 | 第17-18页 |
| ·丙氨酸消旋酶的作用机制 | 第18-19页 |
| ·丙氨酸消旋酶与疾病 | 第19-20页 |
| ·展望 | 第20-21页 |
| 参考文献 | 第21-23页 |
| 第二章 丙氨酸消旋酶Alr的克隆,表达及活性分析 | 第23-38页 |
| ·前言 | 第23页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·载体和菌株 | 第23页 |
| ·主要的酶和化学试剂 | 第23页 |
| ·主要的仪器设备 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-27页 |
| ·丙氨酸消旋酶Alr的克隆 | 第23-24页 |
| ·重组质粒的构建 | 第24页 |
| ·重组Alr的表达与纯化 | 第24-25页 |
| ·丙氨酸消旋酶的测活体系的构建 | 第25页 |
| ·Alr的分子量测定 | 第25-26页 |
| ·测定Alr的基本动力学参数 | 第26页 |
| ·温度、pH及二价金属离子对丙氨酸消旋酶Alr的影响 | 第26-27页 |
| ·结果及讨论 | 第27-34页 |
| ·丙氨酸消旋酶Alr的克隆 | 第27页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第27页 |
| ·丙氨酸消旋酶Alr的序列分析 | 第27-29页 |
| ·以L-Alanine为底物测定Alr的基本动力学参数 | 第29-30页 |
| ·温度、pH及二价金属离子对丙氨酸消旋酶Alr的影响 | 第30-31页 |
| ·丙氨酸消旋酶Alr分子量的测定 | 第31-33页 |
| ·丙氨酸消旋酶Alr的二级结构分析 | 第33-34页 |
| ·小结 | 第34-36页 |
| 参考文献 | 第36-38页 |
| 第三章 丙氨酸消旋酶Alr的结晶以及晶体结构解析 | 第38-50页 |
| ·前言 | 第38页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·载体和菌株 | 第38页 |
| ·主要的酶和化学试剂 | 第38页 |
| ·主要的仪器设备 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-41页 |
| ·蛋白质晶体学原理 | 第38-39页 |
| ·晶体学方法 | 第39-40页 |
| ·丙氨酸消旋酶Alr的晶体条件筛选 | 第40-41页 |
| ·丙氨酸消旋酶Alr与辅因子PLP的晶体条件筛选 | 第41页 |
| ·Alr晶体数据收集 | 第41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-47页 |
| ·丙氨酸消旋酶Alr晶体生长:采用坐滴法获得用于衍射的晶体 | 第41-42页 |
| ·Alr结晶过程伴随蛋白的部分降解 | 第42-43页 |
| ·丙氨酸消旋酶Alr衍射数据收集与处理 | 第43-45页 |
| ·Alr晶体的整体结构 | 第45-46页 |
| ·丙氨酸消旋酶Alr与辅因子PLP的晶体筛选 | 第46页 |
| ·Alr+PLP衍射结果 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-50页 |
| 第四章 丙氨酸消旋酶dadX的克隆,表达及活性分析 | 第50-63页 |
| ·前言 | 第50页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·载体和菌株 | 第50页 |
| ·主要的酶和化学试剂 | 第50页 |
| ·主要的仪器设备 | 第50-51页 |
| ·方法 | 第51-53页 |
| ·丙氨酸消旋酶dadX的克隆 | 第51页 |
| ·重组质粒的构建 | 第51-52页 |
| ·重组蛋白表达与纯化 | 第52页 |
| ·以L-Alanine为底物测定MBP-dadX的基本动力学参数 | 第52页 |
| ·pH及二价金属离子对丙氨酸消旋酶MBP-dadX的影响 | 第52-53页 |
| ·结果及讨论 | 第53-59页 |
| ·丙氨酸消旋酶dadX的克隆 | 第53页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第53-54页 |
| ·丙氨酸消旋酶dadX的序列分析 | 第54-55页 |
| ·丙氨酸消旋酶dadX的表达及纯化 | 第55-57页 |
| ·MBP-dadX的动力学参数 | 第57页 |
| ·pH及二价金属离子对丙氨酸消旋酶MBP-dadX的影响 | 第57-59页 |
| ·小结 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
| 附录 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
| 个人简况及联系方式 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第68-70页 |
