| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第7-19页 |
| ·木聚糖降解酶系统 | 第7-9页 |
| ·木聚糖酶 | 第9-16页 |
| ·木聚糖酶的催化机制 | 第9页 |
| ·木聚糖酶的分类 | 第9-10页 |
| ·木聚糖酶的研究进展 | 第10-14页 |
| ·菌种选育 | 第10-11页 |
| ·诱变育种 | 第11页 |
| ·培养基的优化 | 第11页 |
| ·基因工程菌的构建 | 第11-14页 |
| ·木聚糖酶的应用 | 第14-16页 |
| ·在造纸工业的应用 | 第14页 |
| ·在饲料工业的应用 | 第14-15页 |
| ·在食品工业的应用 | 第15-16页 |
| ·低聚木糖的制备 | 第16-17页 |
| ·研究意义及目标 | 第17-18页 |
| ·研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 材料和方法 | 第19-31页 |
| ·材料 | 第19-21页 |
| ·菌种与质粒 | 第19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·主要试剂及其来源 | 第19-20页 |
| ·主要仪器设备及其来源 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-31页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第21页 |
| ·电转化 | 第21-22页 |
| ·琼脂糖电泳胶回收DNA片断和质粒抽提 | 第22页 |
| ·DNA磷酸化反应以及连接反应 | 第22页 |
| ·引物设计 | 第22-23页 |
| ·目的基因xynAl的克隆 | 第23-24页 |
| ·重组表达质粒pHsh-xynAl的构建 | 第24页 |
| ·重组表达质粒mRNA二级结构的优化 | 第24-25页 |
| ·重组菌的培养及重组酶的诱导表达 | 第25页 |
| ·pHsh系统与pET系统的比较 | 第25-26页 |
| ·提高重组酶可溶性的尝试 | 第26-27页 |
| ·在成熟肽N端前添加原有的前导肽 | 第26-27页 |
| ·在成熟肽N端添加稀有密码子 | 第27页 |
| ·利用易错PCR随机突变 | 第27页 |
| ·酶的纯化 | 第27-28页 |
| ·重组木聚糖酶的性质分析 | 第28页 |
| ·酶解产物测定方法(TLC) | 第28-29页 |
| ·木聚糖酶活测定 | 第29-30页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第30-31页 |
| 第三章 结果 | 第31-45页 |
| ·木聚糖酶A基因xynA1的人工合成 | 第31-33页 |
| ·木聚糖酶基因的密码子优化 | 第31-32页 |
| ·优化后木聚糖酶基因xynA1的人工合成 | 第32-33页 |
| ·重组表达质粒pHsh-xynA1的构建 | 第33-35页 |
| ·克隆载体pUC19-xynA1的构建 | 第33-34页 |
| ·表达载体pHsh-xynA1的构建 | 第34-35页 |
| ·重组表达质粒mRNA二级结构优化 | 第35-38页 |
| ·重组表达质粒pHsh-xynA1的mRNA二级结构分析 | 第35-36页 |
| ·重组表达质粒pHsh-xynA2的mRNA二级结构分析 | 第36-37页 |
| ·重组表达质粒pHsh-xynA2的构建 | 第37-38页 |
| ·木聚糖酶在大肠杆菌中的重组表达 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第38页 |
| ·重组木聚糖酶的酶活检测 | 第38页 |
| ·pHsh系统与pET系统的比较 | 第38-41页 |
| ·重组表达载体pET-20b-xynA的构建 | 第38-39页 |
| ·表达载体pET-20b-xynA在大肠杆菌JM109(DE3)中的表达 | 第39-41页 |
| ·提高重组酶的可溶性 | 第41页 |
| ·重组木聚糖酶的纯化 | 第41页 |
| ·重组木聚糖酶的酶学性质 | 第41-44页 |
| ·重组木聚糖酶的最适反应pH | 第42-43页 |
| ·重组木聚糖酶的最适反应温度 | 第43页 |
| ·重组木聚糖酶的pH稳定性 | 第43-44页 |
| ·重组木聚糖酶的温度稳定性 | 第44页 |
| ·重组菌胞内裂解液水解木聚糖的TLC图谱 | 第44-45页 |
| 第四章 讨论 | 第45-50页 |
| ·密码子使用频率对基因表达的影响 | 第45-46页 |
| ·信号肽对基因表达的影响 | 第46页 |
| ·MRNA结构对基因表达的影响 | 第46-47页 |
| ·蛋白可溶性的问题 | 第47-48页 |
| ·表达水平的评价 | 第48-50页 |
| 主要结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
