| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 第一部分 椎间盘退变动物模型的制造 | 第10-23页 |
| 材料和方法 | 第10-17页 |
| 一、材料 | 第10页 |
| 1.实验动物 | 第10页 |
| 2.实验试剂和仪器 | 第10页 |
| 二、方法 | 第10-17页 |
| 1.前期准备 | 第10-11页 |
| ·载玻片防脱片处理 | 第10-11页 |
| ·主要溶液的配制 | 第11页 |
| ·动物准备 | 第11页 |
| 2 羊椎间盘退变模型的制造 | 第11-12页 |
| ·实验动物分组 | 第11-12页 |
| ·手术制造羊腰椎退变动物模型 | 第12页 |
| 3 影像学观察 | 第12页 |
| ·摄腰椎正、侧位DR片 | 第12页 |
| ·侧位DR片影像学分析 | 第12页 |
| 4 组织学观察 | 第12-17页 |
| ·动物处死及收获椎间盘 | 第12-13页 |
| ·椎间盘组织学染色 | 第13-17页 |
| ·椎间盘脱钙处理、石蜡包埋、切片 | 第13页 |
| ·HE染色 | 第13-14页 |
| ·Safranine 0染色 | 第14页 |
| ·Masson染色 | 第14-15页 |
| ·collagen Ⅱ免疫组化染色 | 第15页 |
| ·collagen Ⅰ免疫组化染色 | 第15-16页 |
| ·组织学染色方法、椎间盘数与相应术后动物处死时间 | 第16-17页 |
| 结果 | 第17-22页 |
| 1.影像学 | 第17页 |
| 2.组织学 | 第17-22页 |
| ·HE染色 | 第17-18页 |
| ·Safranine 0染色 | 第18-19页 |
| ·Masson染色 | 第19-20页 |
| ·collagen Ⅱ免疫组化染色 | 第20页 |
| ·collagen Ⅰ免疫组化染色 | 第20-22页 |
| 结论 | 第22-23页 |
| 第二部分 腺相关病毒介导的hTGFβ_1和hVEGF双基因联合体内转染阻逆羊椎间盘退变的生物学效应 | 第23-56页 |
| 材料和方法 | 第23-33页 |
| 一、材料 | 第23-24页 |
| 1.携带基因的病毒载体 | 第23页 |
| 2.实验动物 | 第23页 |
| 3.实验试剂及仪器 | 第23-24页 |
| 二、方法 | 第24-33页 |
| 1.羊椎间盘退变模型的制造 | 第24页 |
| 2.实验动物分组 | 第24页 |
| 3.动物体内椎间盘基因转染 | 第24-26页 |
| 4.观察方法 | 第26-33页 |
| ·影像学观察 | 第26-27页 |
| ·摄腰椎正、侧位DR片 | 第26页 |
| ·侧位DR片影像学分析 | 第26-27页 |
| ·组织学观察 | 第27-28页 |
| ·椎间盘脱钙处理、石蜡包埋、切片 | 第27页 |
| ·椎间盘髓核组织HE染色观察 | 第27页 |
| ·椎间盘髓核组织Safranine 0染色观察 | 第27页 |
| ·椎间盘髓核组织Masson染色观察 | 第27页 |
| ·椎间盘髓核组织TGFβ1的免疫组化观察 | 第27-28页 |
| ·椎间盘髓核组织VEGF的免疫组化观察 | 第28页 |
| ·椎间盘髓核组织EGFP的观察 | 第28页 |
| ·椎间盘髓核组织collagen Ⅱ免疫组化染色观察 | 第28页 |
| ·椎间盘髓核组织collagen Ⅰ免疫组化染色观察 | 第28页 |
| ·生物化学检测 | 第28-33页 |
| ·~(35)S整合法测定髓核组织蛋白多糖合成率 | 第28-29页 |
| ·~(35)S整合法检测蛋白多糖合成率原理 | 第28-29页 |
| ·试剂的配制 | 第29页 |
| ·实验椎间盘髓核组织的收获、培养及处理 | 第29页 |
| ·~(35)S放射率的测定 | 第29页 |
| ·免疫印迹Western-Blot法检测髓核组织Ⅱ型胶原的含量 | 第29-33页 |
| ·试剂的配制 | 第29页 |
| ·组织收获、裂解和样品的制备 | 第29-30页 |
| ·Bradford比色法测定样品蛋白质浓度 | 第30页 |
| ·配胶 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第31页 |
| ·转膜、封闭和杂交 | 第31-32页 |
| ·β-actin | 第32页 |
| ·Western-blot条带整合灰度测定 | 第32页 |
| ·统计学处理 | 第32-33页 |
| 结果 | 第33-39页 |
| 1.影像学 | 第33页 |
| 2.组织学 | 第33-37页 |
| ·HE染色 | 第33-34页 |
| ·Safranine 0染色 | 第34页 |
| ·Masson染色 | 第34-35页 |
| ·TGF β 1免疫组化染色 | 第35页 |
| ·VEGF免疫组化染色 | 第35-36页 |
| ·实验椎间盘髓核组织EGFP荧光观察结果 | 第36页 |
| ·collagen Ⅱ免疫组化染色 | 第36页 |
| ·collagen Ⅰ免疫组化染色 | 第36-37页 |
| 3.生物化学 | 第37-39页 |
| ·~(35)S测定蛋白多糖合成率 | 第37-38页 |
| ·Western Blot法检测Ⅱ型胶原的表达 | 第38-39页 |
| 讨论 | 第39-56页 |
| 一、椎间盘的生理、生化、生物力学特征 | 第39-40页 |
| 二、椎间盘退变机制 | 第40-49页 |
| 三、椎间盘退变动物模型研究进展 | 第49-53页 |
| 四、椎间盘退变基因治疗研究进展 | 第53-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 综述 | 第66-82页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第82页 |
| 攻读学位期间参加的研究项目、科研奖励 | 第82-83页 |
| 附录1 | 第83-86页 |
| 附录2 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
