| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-25页 |
| ·RNA 干扰技术研究进展 | 第9-15页 |
| ·RNA 干扰的研究历史 | 第9-10页 |
| ·RNA 干扰的分子机制 | 第10-11页 |
| ·RNA 干扰的生理功能 | 第11-12页 |
| ·RNA 干扰的实现方法 | 第12-13页 |
| ·RNA 干扰的应用领域 | 第13-14页 |
| ·哺乳动物RNA 干扰技术的发展 | 第14-15页 |
| ·RNA 干扰领域的未来趋势 | 第15页 |
| ·转基因动物技术研究进展 | 第15-24页 |
| ·转基因动物制备的几种方法 | 第16-19页 |
| ·提高转基因效率的策略 | 第19-23页 |
| ·转基因动物技术在畜牧生产中的应用 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 第二章 小鼠Α-1,3-GT 基因沉默载体的构建及其线性化 | 第25-30页 |
| ·材料与方法 | 第25-27页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第25页 |
| ·α-1,3-GT shRNA 沉默基因的设计 | 第25-26页 |
| ·沉默基因的片段化合成 | 第26页 |
| ·沉默基因的PCR 连接及扩增 | 第26-27页 |
| ·连接及转化 | 第27页 |
| ·重组子的筛选及鉴定 | 第27页 |
| ·Apal I 酶切使其线性化 | 第27页 |
| ·结果 | 第27-28页 |
| ·PCR 法连接合成条件的优化及结果鉴定 | 第27页 |
| ·重组子的鉴定 | 第27页 |
| ·Apal I 酶切 | 第27-28页 |
| ·讨论 | 第28-29页 |
| ·干扰载体设计中启动子的选择 | 第28-29页 |
| ·沉默基因的PCR 法合成 | 第29页 |
| ·RNA 干扰技术是基因敲除方法的进一步发展 | 第29页 |
| ·小结 | 第29-30页 |
| 第三章 显微注射法向小鼠导入Α-1,3-GT 沉默基因 | 第30-38页 |
| ·材料与方法 | 第30-33页 |
| ·器材的准备 | 第30-31页 |
| ·小鼠的超数排卵和假孕母鼠的制备 | 第31-32页 |
| ·原核胚的获取 | 第32页 |
| ·受精卵的培养 | 第32页 |
| ·原核胚的显微注射 | 第32-33页 |
| ·胚胎移植-伞口植入法 | 第33页 |
| ·助产与出生 | 第33页 |
| ·数据分析 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-35页 |
| ·显微注射和胚胎移植的试验结果 | 第33-34页 |
| ·移入胚胎数对小鼠受孕率和产仔率的影响 | 第34页 |
| ·一细胞期与二细胞期胚胎对移植成功率的影响 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| ·显微操作和胚胎移植中应当注意的问题 | 第35-36页 |
| ·影响转基因小鼠原核胚发育的因素 | 第36-37页 |
| ·小结 | 第37-38页 |
| 第四章 Α-1,3-GT 沉默基因在仔鼠体内的整合检测 | 第38-48页 |
| ·材料与方法 | 第38-45页 |
| ·实验样品 | 第38页 |
| ·主要仪器设备 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要试剂及缓冲液的配制 | 第38-39页 |
| ·组织DNA 的提取 | 第39-40页 |
| ·PCR 检测 | 第40-41页 |
| ·DNA 探针的制备 | 第41-43页 |
| ·Southern 印迹杂交法 | 第43-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-46页 |
| ·PCR 检测结果 | 第45页 |
| ·基因组Southern 杂交检测结果 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 附录 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
