| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 正文部分 | 第15-64页 |
| 1 材料及来源 | 第15-21页 |
| ·实验材料 | 第15页 |
| ·菌株 | 第15页 |
| ·载体 | 第15-17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·试剂配方 | 第18-21页 |
| 2 实验方法 | 第21-46页 |
| ·通过RACE的方法扩增5′端cDNA | 第21-29页 |
| ·甘蓝型油菜84100-18无菌苗的获取 | 第21页 |
| ·油菜幼叶RNA的提取 | 第21-22页 |
| ·RACE引物的设计 | 第22-23页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第23页 |
| ·cDNA的纯化 | 第23-24页 |
| ·cDNA末端加尾 | 第24页 |
| ·第一轮PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·第二轮PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·PCR产物的回收 | 第26页 |
| ·E.coli JM109感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·回收片段连接pMD18-T载体 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的转化 | 第28页 |
| ·阳性克隆的检测及测序 | 第28-29页 |
| ·利用染色体步移方法继续扩增基因的5’-端序列 | 第29-35页 |
| ·油菜总DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·总DNA的酶切建库与纯化 | 第30-31页 |
| ·接头的制作 | 第31-32页 |
| ·接头与DNA片段的连接 | 第32页 |
| ·染色体步移的引物的设计 | 第32页 |
| ·染色体步移第一轮PCR反应 | 第32-33页 |
| ·染色体步移第二轮PCR反应 | 第33-34页 |
| ·PCR产物的回收,连接,转化 | 第34页 |
| ·阳性克隆的检测及测序 | 第34-35页 |
| ·基因全长的克隆 | 第35-38页 |
| ·基因的扩增 | 第35-36页 |
| ·PCR产物的回收,连接,转化 | 第36页 |
| ·阳性克隆的检测及测序 | 第36-38页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第38-46页 |
| ·pMD18-目的基因产物的抽取 | 第38页 |
| ·pBluescript SK载体的Silica法大量抽提 | 第38-39页 |
| ·pMD-18目的基因产物与pSK载体的双酶切与回收 | 第39-40页 |
| ·产物片段与载体片段的连接转化与检测 | 第40-42页 |
| ·正反向中间载体的酶切与回收 | 第42-43页 |
| ·pCAMBIA 2301G载体碱裂法大量抽提 | 第43-44页 |
| ·2301G载体的酶切与回收 | 第44页 |
| ·2301G载体片段与中间载体片段的连接和检测 | 第44-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-62页 |
| ·油菜幼叶RNA的提取 | 第46页 |
| ·RACE扩增基因序列 | 第46-47页 |
| ·染色体步移扩增基因序列 | 第47-48页 |
| ·基因全长的扩增 | 第48-49页 |
| ·基因序列分析 | 第49-50页 |
| ·基因蛋白质序列分析 | 第50-58页 |
| ·基因的cDNA序列全长及推导的蛋白质序列 | 第50-52页 |
| ·蛋白质同源性比对分析 | 第52-53页 |
| ·蛋白质结构分析 | 第53-58页 |
| ·一级结构的分析 | 第53-54页 |
| ·二级结构的分析 | 第54-55页 |
| ·信号肽序列分析 | 第55-57页 |
| ·跨膜区域的预测 | 第57-58页 |
| ·三级结构的预测 | 第58页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第58-62页 |
| ·pMD18-359目的基因酶切检测 | 第58-59页 |
| ·正反向pSK-359中间载体的酶切检测 | 第59-60页 |
| ·正反向2301G-359载体的酶切检测 | 第60-62页 |
| 4 小结与讨论 | 第62-64页 |
| 文献综述 | 第64-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 致谢 | 第88页 |