| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 前言 | 第12-15页 |
| 正文 | 第15-62页 |
| 第一章 盐生杜氏藻线粒体3-磷酸甘油脱氢酶基因的克隆 | 第15-27页 |
| 1 材料和方法 | 第15-22页 |
| ·材料 | 第15-16页 |
| ·藻种 | 第15页 |
| ·菌种 | 第15页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第15-16页 |
| ·培养基 | 第16页 |
| ·仪器 | 第16页 |
| ·方法 | 第16-22页 |
| ·盐生杜氏藻的培养 | 第16页 |
| ·总 RNA的提取 | 第16-17页 |
| ·总 RNA质量的检测 | 第17页 |
| ·引物设计 | 第17页 |
| ·DsFAD-GPDH基因3’端序列的克隆 | 第17-19页 |
| ·DsFAD-GPDH基因5’端序列的克隆 | 第19-20页 |
| ·测序 | 第20-21页 |
| ·全长cDNA序列拼接 | 第21页 |
| ·一般反转录 PCR | 第21-22页 |
| ·全长cDNA的编码序列的验证 | 第22页 |
| 2 结果与分析 | 第22-25页 |
| ·总RNA的质量检测 | 第22页 |
| ·DsFAD-GPDH基因cDNA的3’端序列克隆 | 第22-23页 |
| ·DsFAD-GPDH基因cDNA的5’端序列克隆 | 第23-24页 |
| ·DsFAD-GPDH基因全长cDNA序列的拼接 | 第24-25页 |
| 3 讨论 | 第25-27页 |
| 第二章 盐生杜氏藻线粒体3-磷酸甘油脱氢酶基因cDNA的生物信息学分析 | 第27-35页 |
| 1 分析方法 | 第27-28页 |
| ·ORF分析及预测蛋白质的基本性质分析 | 第27页 |
| ·序列相似性搜索 | 第27页 |
| ·结构功能域预测 | 第27页 |
| ·蛋白质序列的多重序列比对 | 第27-28页 |
| ·蛋白质的信号肽预测 | 第28页 |
| ·跨膜结构预测 | 第28页 |
| ·辅基和底物结合位点识别 | 第28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-34页 |
| ·ORF分析及预测蛋白质的基本性质分析 | 第28页 |
| ·序列相似性搜索及蛋白质序列的多重序列比对 | 第28-30页 |
| ·结构功能域预测 | 第30-31页 |
| ·信号肽预测 | 第31页 |
| ·跨膜结构预测 | 第31-32页 |
| ·辅基和底物结合位点识别 | 第32-34页 |
| 3 讨论 | 第34-35页 |
| 第三章 盐生杜氏藻线粒体3-磷酸甘油脱氢酶基因的原核表达、目的蛋白纯化及体外酶活测定 | 第35-49页 |
| 1 材料和方法 | 第35-42页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·菌株和质粒 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35-36页 |
| ·酶制剂和试剂盒 | 第36-37页 |
| ·仪器 | 第37页 |
| ·层析柱子 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-42页 |
| ·DsFAD-GPDH基因ORF的扩增 | 第37-38页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶的配制 | 第39页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第39-40页 |
| ·样品的制备和电泳 | 第40页 |
| ·凝胶染色 | 第40-41页 |
| ·亲和层析纯化 | 第41页 |
| ·重组蛋白中咪唑的透析及蛋白浓缩 | 第41页 |
| ·重组蛋白浓度的测定 | 第41页 |
| ·重组蛋白的酶活测定 | 第41-42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-47页 |
| ·ORF序列的扩增 | 第42页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第42页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白表达条件的优化 | 第43-45页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| ·蛋白标准曲线制作 | 第46页 |
| ·重组蛋白的体外酶活测定 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 盐生杜氏藻线粒体3-磷酸甘油脱氢酶基因在胁迫条件下的表达变化 | 第49-62页 |
| 1 材料和方法 | 第49-53页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·藻种 | 第49页 |
| ·菌种 | 第49页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第49页 |
| ·仪器 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-53页 |
| ·各种胁迫处理 | 第50页 |
| ·总 RNA的提取及质量的检测 | 第50页 |
| ·反转录反应 | 第50-51页 |
| ·内参基因的选择 | 第51页 |
| ·特异引物和内参引物的设计 | 第51页 |
| ·引物的验证 | 第51页 |
| ·荧光定量 PCR | 第51-52页 |
| ·荧光定量 PCR实验结果的处理 | 第52-53页 |
| ·粗酶液的提取 | 第53页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第53页 |
| ·粗酶活的测定 | 第53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-60页 |
| ·引物的验证 | 第53-54页 |
| ·荧光定量 PCR的结果 | 第54-58页 |
| ·蛋白标准曲线制作 | 第58页 |
| ·粗酶活测定结果 | 第58-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 在读期间科研成果简介 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 综述 | 第70-83页 |
| 酿酒酵母中细胞质 NADH的代谢 | 第70-83页 |
| 摘要 | 第70页 |
| 前言 | 第70-72页 |
| 1 线粒体外部 NADH脱氢酶 | 第72-73页 |
| ·线粒体外部 NADH脱氢酶的物理性质、催化特性和调控机理 | 第72-73页 |
| ·酿酒酵母nde1△nde2△双突变株的生理特征 | 第73页 |
| 2 线粒体3-磷酸甘油脱氢酶和3-磷酸甘油穿梭 | 第73-76页 |
| ·酿酒酵母线粒体3-磷酸甘油脱氢酶基因(GUT2)的克隆 | 第73-74页 |
| ·3-磷酸甘油穿梭的生理功能 | 第74-76页 |
| 3 线粒体外部 NADH脱氢酶与3-磷酸甘油穿梭的相对重要性 | 第76-77页 |
| 4 线粒体外部 NADH脱氢酶(Nde1p/Nde2p)对3-磷酸甘油穿梭的动力学调控 | 第77-80页 |
| 参考文献 | 第80-83页 |
