| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-32页 |
| ·腈水合酶概述 | 第15-22页 |
| ·NHase的种类及其分布 | 第16页 |
| ·NHase的生物合成调节 | 第16页 |
| ·NHase的结构与催化机理 | 第16-19页 |
| ·NHase的特性 | 第19-21页 |
| ·光激活 | 第19页 |
| ·区域选择性 | 第19页 |
| ·立体选择性 | 第19-20页 |
| ·热稳定性 | 第20-21页 |
| ·氨基化合物对腈水合酶活性的影响 | 第21页 |
| ·其他因素对腈水合酶活性的影响 | 第21-22页 |
| ·pH值 | 第21页 |
| ·细胞内组分 | 第21页 |
| ·培养基中的金属离子 | 第21页 |
| ·抑制剂的影响 | 第21-22页 |
| ·鳌合剂的影响 | 第22页 |
| ·对羟基苯乙酰胺概述 | 第22-28页 |
| ·目前国内外的研究现状 | 第23-26页 |
| ·苯乙腈为为原料的合成路线 | 第23-24页 |
| ·苯酚为原料的合成路线 | 第24页 |
| ·苯甲醇为原料的合成路线 | 第24-25页 |
| ·对氯苯乙腈为原料的合成路线 | 第25-26页 |
| ·本论文的研究目的、内容和意义 | 第26-28页 |
| 参考文献 | 第28-32页 |
| 第二章 菌种的筛选及鉴定 | 第32-49页 |
| ·引言 | 第32页 |
| ·试验材料 | 第32-34页 |
| ·土样、菌种和质粒 | 第33页 |
| ·富集培养基及培养条件 | 第33页 |
| ·平板固体培养基及培养条件 | 第33页 |
| ·斜面固体培养基及培养条件 | 第33页 |
| ·产酶培养基及培养条件 | 第33页 |
| ·LB培养基 | 第33-34页 |
| ·SOC培养基 | 第34页 |
| ·仪器设备与试剂 | 第34-35页 |
| ·主要试验仪器 | 第34页 |
| ·主要试验试剂 | 第34-35页 |
| ·试验方法 | 第35-40页 |
| ·菌种初筛 | 第35页 |
| ·菌种复筛 | 第35-36页 |
| ·检测方法 | 第36-37页 |
| ·薄层色谱(TLC)检测 | 第36页 |
| ·高效液相色谱(HPLC)检测 | 第36-37页 |
| ·菌种生理生化鉴定 | 第37页 |
| ·革兰氏染色 | 第37页 |
| ·生理生化特性 | 第37页 |
| ·DNA测序 | 第37-40页 |
| ·菌株16S rDNA的分子生物学鉴定 | 第37-38页 |
| ·16S rDNA基因的PCR扩增及全序列分析 | 第38页 |
| ·16S rDNA基因与pMD18-T载体的克隆 | 第38-39页 |
| ·电转化大肠杆菌感受态细胞的制备及电转化 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌重组质粒的提取 | 第40页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第40页 |
| ·16S r DNA基因同源性分析 | 第40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-48页 |
| ·菌种初筛和复筛 | 第40-41页 |
| ·检测方法 | 第41-45页 |
| ·薄层色谱(TLC)检测 | 第41-42页 |
| ·高效液相色谱(HPLC)检测 | 第42-43页 |
| ·最大吸收波长扫描 | 第43页 |
| ·PHN标准曲线的绘制 | 第43-44页 |
| ·PHAD标准曲线的绘制 | 第44页 |
| ·PHAc标准曲线的绘制 | 第44-45页 |
| ·菌种生理生化鉴定 | 第45-46页 |
| ·生理生化特性 | 第45页 |
| ·革兰氏染色 | 第45-46页 |
| ·DNA测序 | 第46-48页 |
| ·菌株16S rDNA全测序测定与分析 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-49页 |
| 第三章 Rhodococcus ruber E10a细胞培养和产酶条件的研究 | 第49-66页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·试验材料 | 第49-51页 |
| ·菌种 | 第49页 |
| ·培养基和培养条件 | 第49-50页 |
| ·斜面固体培养基： | 第49-50页 |
| ·产酶培养基： | 第50页 |
| ·种子培养基： | 第50页 |
| ·Benedict试剂的制备及发酵液中残糖的测定 | 第50页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第50页 |
| ·仪器设备和试剂 | 第50-51页 |
| ·试验主要仪器 | 第50-51页 |
| ·试验主要试剂 | 第51页 |
| ·试验方法 | 第51-55页 |
| ·酶活单位定义 | 第51页 |
| ·E10a生长曲线的测定 | 第51-52页 |
| ·E10a种子培养生长曲线的测定 | 第51-52页 |
| ·E10a产酶培养活性及菌体量的测定 | 第52页 |
| ·诱导剂对产酶条件的影响 | 第52-53页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第53页 |
| ·培养基中尿素、谷氨酸钠对酶活的影响 | 第53-54页 |
| ·氮源对酶活的影响 | 第54-55页 |
| ·有机氮源对酶活的影响 | 第54页 |
| ·无机氮源对酶活的影响 | 第54-55页 |
| ·碳源对酶活的影响 | 第55页 |
| ·传代稳定性的考察 | 第55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-64页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第55-56页 |
| ·E10a生长曲线的测定 | 第56-58页 |
| ·E10a种子培养生长曲线的测定 | 第56-57页 |
| ·E10a产酶培养活性及菌体量的测定 | 第57-58页 |
| ·诱导剂对产酶条件的影响 | 第58-59页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第59-60页 |
| ·培养基中尿素、谷氨酸钠对酶活的影响 | 第60-62页 |
| ·有机氮源对酶活的影响 | 第61-62页 |
| ·无机氮源对酶活的影响 | 第62页 |
| ·碳源对酶活的影响 | 第62-63页 |
| ·传代稳定性的考察 | 第63-64页 |
| ·结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-66页 |
| 第四章 Rhodococcus ruber E10a静息细胞转化条件研究 | 第66-80页 |
| ·引言 | 第66-67页 |
| ·试验材料 | 第67页 |
| ·菌种 | 第67页 |
| ·转化液 | 第67页 |
| ·仪器设备和试剂 | 第67页 |
| ·实验主要仪器 | 第67页 |
| ·实验主要试剂 | 第67页 |
| ·试验方法 | 第67-70页 |
| ·静息细胞制备 | 第67-68页 |
| ·菌体干重—0D值的关系曲线测定 | 第68页 |
| ·转化液中菌体量对酶活的影响 | 第68页 |
| ·初始pH对酶活的影响 | 第68-69页 |
| ·底物浓度对酶活的影响 | 第69页 |
| ·产物的生成和底物的消耗曲线 | 第69页 |
| ·动力学参数的测定 | 第69页 |
| ·产物对酶活的影响 | 第69页 |
| ·温度对酶活的影响 | 第69-70页 |
| ·不同温度条件下的酶活测定 | 第69-70页 |
| ·酶的热稳定性测定 | 第70页 |
| ·底物特异性 | 第70页 |
| ·结果与讨论 | 第70-78页 |
| ·菌体干重—0D值的关系曲线测定 | 第70-71页 |
| ·转化液中菌体量对酶活的影响 | 第71-72页 |
| ·初始pH对酶活的影响 | 第72-73页 |
| ·底物浓度对酶活的影响 | 第73-76页 |
| ·产物的生成和底物的消耗曲线 | 第73-74页 |
| ·动力学参数的测定 | 第74-76页 |
| ·产物对酶活的影响 | 第76页 |
| ·温度对酶活的影响 | 第76-78页 |
| ·不同温度条件下的酶活测定 | 第76-77页 |
| ·酶的热稳定性测定 | 第77-78页 |
| ·底物特异性 | 第78页 |
| ·结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-80页 |
| 第五章 总结 | 第80-82页 |
| 附录1 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 论文发表情况 | 第85页 |