| 引言 | 第1-31页 |
| 1 SARS-CoV的形态结构 | 第15-16页 |
| 2 SARS-CoV的病原学与分类 | 第16-17页 |
| 3 SARS-CoV的基因组研究进展 | 第17-19页 |
| 4 SARS-CoV的受体 | 第19-20页 |
| 5 SARS-CoV的包装信号 | 第20页 |
| 6 SARS-CoV基因组编码蛋白 | 第20-24页 |
| 7 SARS-CoV S蛋白抗原表位的研究进展 | 第24-25页 |
| 8 SARS-CoV N蛋白抗原表位的研究进展 | 第25页 |
| 9 SARS的免疫学及分子生物学诊断方法研究进展 | 第25-28页 |
| 10 SARS防治研究进展 | 第28-30页 |
| 11 存在的问题与展望 | 第30页 |
| 12 本研究目的与意义 | 第30-31页 |
| 研究报告 | 第31-98页 |
| 实验一 SARS冠状病毒结构蛋白表位预测及多表位嵌合基因的构建与表达 | 第31-42页 |
| 1 材料与方法 | 第33-34页 |
| ·菌株与质粒 | 第33页 |
| ·酶与标记物 | 第33页 |
| ·抗SARS-CoV血清 | 第33页 |
| ·结构蛋白抗原表位的预测 | 第33页 |
| ·嵌合基因的设计与合成 | 第33-34页 |
| ·pGEX-SSCV融合表达载体的构建 | 第34页 |
| ·重组质粒的原核表达与纯化 | 第34页 |
| ·Western biot检测融合蛋白与SARS康复病人血清的免疫反应性 | 第34页 |
| 2 结果 | 第34-41页 |
| ·结构蛋白特性分析及表位预测 | 第34-37页 |
| ·嵌合基因的设计 | 第37-39页 |
| ·融合表达质粒的构建 | 第39页 |
| ·GST-SSCV融合蛋白的表达 | 第39-40页 |
| ·GST-SSCV融合蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| ·融合蛋白的免疫反应性 | 第41页 |
| 3 讨论 | 第41-42页 |
| 实验二 SARS冠状病毒单克隆抗体的制备及表位鉴定 | 第42-53页 |
| 1 材料与方法 | 第42-45页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第42-43页 |
| ·表达S蛋白预测表位寡核苷酸链的设计 | 第43页 |
| ·表达覆盖S2和S5的9氨基酸短肽系列的设计 | 第43页 |
| ·预测表位及9肽的融合表达 | 第43-44页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第44-45页 |
| ·免疫印迹试验(Western blot) | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-51页 |
| ·预测表位及9肽融合蛋白的表达 | 第45页 |
| ·重组多表位融合蛋白GST—D免疫印迹检测结果 | 第45页 |
| ·预测表位融合蛋白GST—S2和GST—S5免疫印迹检测结果 | 第45-46页 |
| ·单克隆抗体的制备与鉴定 | 第46-48页 |
| ·单克隆抗体的表位鉴定 | 第48页 |
| ·单克隆抗体表位的精确定位 | 第48-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 实验三 SARS冠状病毒S蛋白单克隆抗体2C5识别表位的鉴定 | 第53-65页 |
| 1 材料与方法 | 第53-58页 |
| ·噬菌体随机肽库、菌株和单克隆抗体 | 第53-54页 |
| ·其它试剂与材料 | 第54页 |
| ·主要试剂的配制 | 第54页 |
| ·噬菌体的滴定 | 第54-55页 |
| ·噬菌体肽库的亲和筛选 | 第55-56页 |
| ·筛选噬菌体的克隆和扩增 | 第56-57页 |
| ·噬菌体序列的测定 | 第57页 |
| ·噬菌体ELISA | 第57页 |
| ·噬菌体竟争抑制ELISA | 第57页 |
| ·多肽的融合表达与融合蛋白的纯化 | 第57-58页 |
| ·融合蛋白与单克隆抗体2C5的ELISA分析 | 第58页 |
| ·融合蛋白与鸡抗SARS冠状病毒血清的Western blot分析 | 第58页 |
| 2 结果 | 第58-63页 |
| ·噬菌体肽库的筛选 | 第58-59页 |
| ·噬菌体的克隆与结合分析 | 第59-60页 |
| ·噬菌体展示序列的测定与分析 | 第60-61页 |
| ·噬菌体的竟争ELISA | 第61-62页 |
| ·短肽的融合表达与纯化 | 第62页 |
| ·融合蛋白的免疫反应性 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| 实验四 SARS冠状病毒S蛋白S1部分的表达与免疫分析 | 第65-74页 |
| 1 材料与方法 | 第66-68页 |
| ·质粒、菌种及SARS基因 | 第66页 |
| ·血清、抗体及试剂 | 第66页 |
| ·S1、S1N、S1C及SRBD基因片段的PCR扩增 | 第66-67页 |
| ·S1、S1N、S1C及SRBD片段表达质粒的构建 | 第67页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第67页 |
| ·表达产物的Western blot分析 | 第67-68页 |
| ·表达产物的ELISA分析 | 第68页 |
| 2 结果 | 第68-72页 |
| ·PCR扩增 | 第68页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第68页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第68-71页 |
| ·表达产物的Western blot分析 | 第71页 |
| ·表达产物的ELISA分析 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-74页 |
| 实验五 SARS冠状病毒S1蛋白主要抗原决定区的表位作图 | 第74-86页 |
| 1 材料与方法 | 第75-79页 |
| ·质粒怀菌株 | 第75页 |
| ·酶与标记物 | 第75页 |
| ·抗SARS-CoV阳性血清及真核表达S蛋门抗原 | 第75页 |
| ·短肽融合蛋白的设计 | 第75-78页 |
| ·短肽融合蛋白表达质粒的构建及表达纯化 | 第78页 |
| ·鼠抗融合蛋白血清的制备 | 第78页 |
| ·Western blot | 第78页 |
| ·ELISA | 第78-79页 |
| ·动物免疫 | 第79页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第79页 |
| 2 结果 | 第79-85页 |
| ·短肽融合蛋白的表达与纯化 | 第79-80页 |
| ·抗原表位作图 | 第80-83页 |
| ·抗原表位的免疫原性 | 第83页 |
| ·抗表位单因子血清的特性 | 第83-85页 |
| 3 讨论 | 第85-86页 |
| 实验六 SARS冠状病毒S蛋白受体结合结构域的表达及表位作图 | 第86-98页 |
| 1 材料和方法 | 第86-91页 |
| ·质粒与菌株 | 第86页 |
| ·酶与标记物 | 第86-87页 |
| ·抗SARS-CoV阳性血清 | 第87页 |
| ·pGEX-SRBD融合表达载体的构建与表达 | 第87页 |
| ·短肽融合蛋白的设计与表达纯化 | 第87-90页 |
| ·短肽融合蛋白表达质粒的构建及表达纯化 | 第90页 |
| ·鼠抗融合蛋白GST-SRBD和GST-SRBD3血清的制备 | 第90-91页 |
| ·Western blot | 第91页 |
| ·ELISA | 第91页 |
| 2 结果 | 第91-96页 |
| ·受体结合结构域的融合表达与免疫印迹分析 | 第91-93页 |
| ·短肽融合蛋白的表达与纯化 | 第93-94页 |
| ·短肽融合蛋白的Western blot分析与ELSIA分析 | 第94-95页 |
| ·SRBD3的免疫原性 | 第95-96页 |
| ·受体结构区抗原表位作图结果 | 第96页 |
| 3 讨论 | 第96-98页 |
| 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 作者简介 | 第117-118页 |
