| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 前言 | 第7-10页 |
| 材料与方法 | 第10-30页 |
| 1 实验材料 | 第10-12页 |
| ·PCR反应模板 | 第10页 |
| ·实验菌株与质粒 | 第10页 |
| ·酶与实验试剂 | 第10-11页 |
| ·细胞株 | 第11页 |
| ·仪器设备 | 第11-12页 |
| 2 实验步骤 | 第12-30页 |
| ·淡色库蚊抗药性相关基因克隆 | 第12-16页 |
| ·引物设计 | 第12-13页 |
| ·基因扩增 | 第13-14页 |
| ·目的PCR产物的纯化回收 | 第14-15页 |
| ·T／A克隆 | 第15-16页 |
| ·真核表达载体pIE1-3／NYD-Ch和pIE1-3／NYD-Tr的构建和鉴定 | 第16-19页 |
| ·质粒DNA的提取和纯化 | 第16-17页 |
| ·重组T载体和质粒pIE1-3的酶切 | 第17-18页 |
| ·目的基因与质粒载体的连接 | 第18页 |
| ·pIE1-3／NYD-Ch和pIE1-3／NYD-Tr重组质粒的转化 | 第18页 |
| ·pIE1-3／NYD-Ch和pIE1-3／NYD-Tr重组质粒的PCR鉴定 | 第18-19页 |
| ·pIE1-3／NYD-Ch和pIE1-3／NYD-Tr重组质粒的酶切鉴定 | 第19页 |
| ·蚊细胞培养、基因转染和稳定转染细胞系的建立及鉴定 | 第19-27页 |
| ·C6／36细胞培养 | 第19-20页 |
| ·G418效应测定 | 第20页 |
| ·基因转染及共转染 | 第20-22页 |
| ·单克隆化及稳定转染细胞系的建立 | 第22-23页 |
| ·pIE1-3／NYD-Ch和pIE1-3／NYD-Tr基因稳定转染细胞系的RT-PCR鉴定 | 第23-25页 |
| ·pIE1-3／NYD-Ch和pIE1-3／NYD-Tr基因稳定转染细胞系的Western blotting鉴定 | 第25-27页 |
| ·抗药性相关糜蛋白酶和胰蛋白酶基因的初步功能鉴定 | 第27-30页 |
| ·溴化钾噻唑基四唑(MTT)显色法测定细胞相对存活率 | 第27-29页 |
| ·流式细胞仪检测细胞调亡和细胞周期变化 | 第29-30页 |
| 结果 | 第30-40页 |
| 1 PCR和T／A克隆 | 第30-31页 |
| 2 昆虫细胞表达载体构建和鉴定 | 第31-32页 |
| 3 G418效应测定 | 第32-33页 |
| 4 pIE1-3／NYD-Ch和pIE1-3／NYD-Tr基因稳定转染细胞系的建立和表达鉴定 | 第33-35页 |
| 5 MTT法测细胞相对存活率 | 第35-38页 |
| 6 流式细胞仪检测结果 | 第38-40页 |
| 讨论 | 第40-44页 |
| 小结 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 综述：昆虫抗药性的进化和遗传 | 第56-76页 |
| 论文独创性声明 | 第76页 |
| 论文使用授权声明 | 第76页 |
