| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-21页 |
| 1．1 文献综述 | 第10-19页 |
| 1．1．1 脱硫概述 | 第10-12页 |
| 1．1．2 生物脱硫方法简介 | 第12-15页 |
| 1．1．3 微生物脱有机硫相关酶学以及分子机理研究 | 第15-17页 |
| 1．1．4 黄素还原酶领域的研究 | 第17-19页 |
| 1．2 研究前景与展望 | 第19-21页 |
| 第二章 脱硫菌株鉴定 | 第21-33页 |
| 2．1 引言 | 第21页 |
| 2．2 材料和方法 | 第21-26页 |
| 2．2．1 菌株 | 第21页 |
| 2．2．2 主要仪器和试剂 | 第21-22页 |
| 2．2．3 培养基和缓冲液及其它试剂 | 第22-23页 |
| 2．2．4 生理生化性质测定 | 第23-26页 |
| 2．2．5 细胞破碎 | 第26页 |
| 2．2．6 黄素还原酶活力的测定 | 第26页 |
| 2．3 结果和讨论 | 第26-32页 |
| 2．3．1 菌株的简单性质 | 第26-30页 |
| 2．3．2 微板光谱仪条件下的 NADH浓度和吸光度的关系 | 第30-31页 |
| 2．3．3 粗酶液破碎 | 第31-32页 |
| 2．4 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 黄素还原酶的酶纯化 | 第33-50页 |
| 3．1 引言 | 第33页 |
| 3．2 材料和方法 | 第33-40页 |
| 3．2．1 菌株和培养基 | 第33页 |
| 3．2．2 主要仪器和试剂 | 第33-34页 |
| 3．2．3 缓冲液及其它试剂配制 | 第34-35页 |
| 3．2．4 蛋白质浓度测定方法 | 第35页 |
| 3．2．5 黄素还原酶酶活测定方法 | 第35-36页 |
| 3．2．6 电泳方法 | 第36页 |
| 3．2．7 电泳染色方法 | 第36-38页 |
| 3．2．8 粗酶液制备 | 第38页 |
| 3．2．9 硫酸鱼精蛋白沉淀 | 第38页 |
| 3．2．10 硫酸钱沉淀 | 第38页 |
| 3．2．11 Butyl-Sepharose FF柱层析 | 第38-39页 |
| 3．2．12 分子筛柱层析 | 第39页 |
| 3．2．13 阴离子层析 | 第39页 |
| 3．2．14 SDS-PAGE电泳 | 第39-40页 |
| 3．2．15 电泳样品处理 | 第40页 |
| 3．3 结果与讨论 | 第40-49页 |
| 3．3．1 蛋白质浓度标准曲线绘制 | 第40-41页 |
| 3．3．2 硫酸鱼精蛋白沉淀 | 第41页 |
| 3．3．3 硫酸钱沉淀 | 第41-43页 |
| 3．3．4 Butyl-Sepharose FF柱层析 | 第43-44页 |
| 3．3．5 分子筛柱层析 | 第44-46页 |
| 3．3．6 离子交换层析 | 第46页 |
| 3．3．7 最终纯化结果简表 | 第46-47页 |
| 3．3．8 SDS-PAGE结果 | 第47-49页 |
| 3．4 小结 | 第49-50页 |
| 第四章 黄素还原酶的性质测定 | 第50-62页 |
| 4．1 引言 | 第50页 |
| 4．2 材料和方法 | 第50-52页 |
| 4．2．1 菌株和培养基 | 第50页 |
| 4．2．2 主要仪器和试剂 | 第50页 |
| 4．2．3 温度对酶活以及酶稳定性的影响 | 第50-51页 |
| 4．2．4 pH对酶活的影响 | 第51页 |
| 4．2．5 各种金属离子对酶活的影响 | 第51页 |
| 4．2．6 不同底物对酶活的影响 | 第51页 |
| 4．2．7 底物 K_m值的测定 | 第51页 |
| 4．2．8 N端序列测定 | 第51-52页 |
| 4．2．9 分子筛层析测定相对分子质量 | 第52页 |
| 4．3 结果和讨论 | 第52-61页 |
| 4．3．1 温度对酶活以及酶稳定性的影响 | 第52-54页 |
| 4．3．2 pH对酶活的影响 | 第54-55页 |
| 4．3．3 各种金属离子对酶活的影响 | 第55页 |
| 4．3．4 不同底物对酶活的影响 | 第55-56页 |
| 4．3．5 底物 K_m值的测定 | 第56-57页 |
| 4．3．6 N流序列测定以及简并引物的设计 | 第57-60页 |
| 4．3．7 分子筛层析测定相对分子量 | 第60-61页 |
| 4．4 小结 | 第61-62页 |
| 第五章 基因组文库的建立和黄素还原酶基因的筛选 | 第62-74页 |
| 5．1 引言 | 第62页 |
| 5．2 材料和方法 | 第62-69页 |
| 5．2．1 菌株和培养基 | 第62页 |
| 5．2．2 主要仪器和试剂 | 第62-63页 |
| 5．2．3 基因组提取方法 | 第63页 |
| 5．2．4 基因组的 Sau3AI部分酶切消化 | 第63-64页 |
| 5．2．5 回收所需要片段(4-6 kb) | 第64页 |
| 5．2．6 载体pUC19的处理 | 第64-65页 |
| 5．2．7 连接转化 | 第65-66页 |
| 5．2．8 原位杂交和 Southern杂交 | 第66-69页 |
| 5．3 结果和讨论 | 第69-73页 |
| 5．3．1 X7C基因组的提取和不完全酶切消化 | 第69-71页 |
| 5．3．2 载体的处理 | 第71-72页 |
| 5．3．3 连接转化 | 第72页 |
| 5．3．4 原位杂交初筛结果 | 第72-73页 |
| 5．4 小结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 论文 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
