| 第一部分 鸡IL-2基因的克隆、鉴定与表达 | 第1-41页 |
| 第一章 引言 | 第13-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-29页 |
| ·实验动物 | 第15页 |
| ·质粒和菌种 | 第15页 |
| ·酶类及相关试剂 | 第15页 |
| ·培养基 | 第15页 |
| ·常用溶液配制 | 第15-17页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·鸡IL-2基因的克隆与鉴定 | 第17-20页 |
| ·pcDNA3-IL-2真核表达重组质粒的构建与鉴定 | 第20-24页 |
| ·pGEX-4T-1-IL-2原核表达重组质粒的构建 | 第24-27页 |
| ·重组质粒PGEX-4T-1-IL-2的原核表达 | 第27-29页 |
| 第三章 结果与分析 | 第29-37页 |
| ·鸡IL-2基因的RT-PCR扩增 | 第29页 |
| ·鸡IL-2基因RT-PCR产物的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·pcDNA3-IL-2重组质粒的鉴定 | 第30-32页 |
| ·IL-2基因测序结果 | 第32-33页 |
| ·pGEX-4T-1-IL-2重组质粒的构建 | 第33页 |
| ·pGEX-4T-1-IL-2重组质粒的鉴定 | 第33-34页 |
| ·GST-IL-2融合蛋白的表达及纯化 | 第34-36页 |
| ·GST-IL-2融合蛋白含量的测定 | 第36-37页 |
| 第四章 讨论 | 第37-41页 |
| ·鸡IL-2基因的体外扩增条件 | 第37-38页 |
| ·鸡IL-2基因的序列分析 | 第38页 |
| ·鸡IL-2基因的表达 | 第38-39页 |
| ·原核表达载体的选择 | 第39页 |
| ·包涵体的溶解和纯化 | 第39-40页 |
| ·融合蛋白的复性 | 第40-41页 |
| 第二部分 NDV-F基因的克隆与F-IL-2融合基因重组质粒的构建 | 第41-64页 |
| 第一章 引言 | 第41-44页 |
| 第二章 材料与方法 | 第44-53页 |
| ·病毒 | 第44页 |
| ·质粒和菌种 | 第44页 |
| ·酶类及相关试剂 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·常用溶液配制 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·NDV-F基因克隆与鉴定 | 第44-46页 |
| ·pcDNA3-F重组质粒的构建与鉴定 | 第46-49页 |
| ·pcDNA3-F-IL-2融合基因重组质粒的构建与鉴定 | 第49-53页 |
| 第三章 结果与分析 | 第53-60页 |
| ·RT-PCR扩增NDV F48E9株的F基因 | 第53页 |
| ·RT-PCR产物的酶切鉴定 | 第53-54页 |
| ·pcDNA3-F重组质粒的构建 | 第54页 |
| ·pcDNA3-F重组质粒的鉴定 | 第54-55页 |
| ·F基因测序结果 | 第55-57页 |
| ·NDV F-CHIL-2融合基因的克隆 | 第57页 |
| ·NDV F-CHIL-2融合基因测序结果 | 第57-60页 |
| 第四章 讨论 | 第60-64页 |
| ·关于新城疫F基因疫苗的研究 | 第60页 |
| ·载体的选择 | 第60-61页 |
| ·引物设计的要求 | 第61页 |
| ·鸡IL-2在新城疫F基因疫苗中的作用 | 第61-62页 |
| ·pcDNA3-F-IL-2融合基因重组质粒 | 第62-64页 |
| 第三部分 NDV-F重组质粒的真核表达及其鉴定 | 第64-75页 |
| 第一章 引言 | 第64-66页 |
| 第二章 材料与方法 | 第66-70页 |
| ·细胞株 | 第66页 |
| ·培养基 | 第66页 |
| ·常用溶液配制 | 第66-67页 |
| ·试剂 | 第67页 |
| ·主要仪器 | 第67页 |
| ·质粒DNA的无菌处理 | 第67页 |
| ·细胞培养 | 第67-68页 |
| ·脂质体介导的转染 | 第68页 |
| ·F基因表达的检测 | 第68-70页 |
| 第三章 结果与分析 | 第70-73页 |
| ·转染前后p815细胞的观察 | 第70页 |
| ·免疫荧光染色检测F基因的瞬时表达 | 第70页 |
| ·RT-PCR鉴定F基因的稳定表达 | 第70页 |
| ·免疫荧光染色检测F基因的稳定表达 | 第70-71页 |
| ·Western blotting 检测F基因的稳定表达 | 第71-73页 |
| 第四章 讨论 | 第73-75页 |
| ·外源基因导入哺乳动物细胞几种方法的比较 | 第73页 |
| ·脂质体介导的质粒转染 | 第73-74页 |
| ·转染细胞系的选择 | 第74页 |
| ·影响脂质体转染的因素 | 第74-75页 |
| 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 作者简介 | 第83页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第83页 |
