| 缩略词表 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 第一部分 前言 | 第11-18页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第18-27页 |
| 1 材料 | 第18-20页 |
| ·细胞株、菌株 | 第18页 |
| ·质粒 | 第18页 |
| ·分子生物学工具酶 | 第18页 |
| ·常用分子生物学试剂盒 | 第18-19页 |
| ·细胞培养和转染试剂 | 第19页 |
| ·免疫组化及Western Blot试剂 | 第19页 |
| ·免疫共沉淀试剂 | 第19-20页 |
| ·其它常规无机盐试剂 | 第20页 |
| ·大型仪器 | 第20页 |
| 2 方法 | 第20-27页 |
| ·载体的构建 | 第20-22页 |
| ·PCR括增目的片段 | 第20页 |
| ·酶切PCR产物和载体 | 第20-21页 |
| ·连接 | 第21页 |
| ·转化 | 第21-22页 |
| ·重组子的筛选 | 第22页 |
| ·测序 | 第22页 |
| ·质粒的小量提取与纯化 | 第22页 |
| ·质粒的大量提取 | 第22-23页 |
| ·哺乳动物细胞的转染 | 第23页 |
| ·Western blot分析 | 第23页 |
| ·结晶紫试验方法 | 第23-24页 |
| ·免疫共沉淀 | 第24页 |
| ·GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第24-25页 |
| ·抗体的制备 | 第25页 |
| ·GST沉淀(pull-down)分析 | 第25页 |
| ·荧光素酶和β-半乳糖苷酶活性测定 | 第25-26页 |
| ·ERβ和转录活性的测定 | 第26页 |
| ·反转录PCR(RT-PCR) | 第26-27页 |
| 第三部分 ERβ在乳腺癌细胞株中的作用研究 | 第27-39页 |
| 1 引言 | 第27页 |
| 2 结果 | 第27-34页 |
| ·ERβ真核表达载体的构建及其转录活性的测定 | 第27-34页 |
| ·重组质粒的构建 | 第27-28页 |
| ·ERβ真核表达载体在肿瘤细胞中的表达 | 第28页 |
| ·ERβ真核表达载体的体外翻译表达 | 第28-29页 |
| ·ERβ转录活性测定 | 第29-30页 |
| ·ERβ稳定转染的乳腺癌细胞株pCDNA3-ERβ-MCF-7的建立 | 第30-31页 |
| ·稳定转染细胞株中ERβ的转录活性测定 | 第31-32页 |
| ·ERβ稳定转染细胞株中ERβ的蛋白表达检测 | 第32页 |
| ·ERβ表达水平的提高对乳腺癌细胞株增殖的影响 | 第32-34页 |
| 3 讨论 | 第34-37页 |
| 4 结论 | 第37页 |
| 5 参考文献 | 第37-39页 |
| 第四部分 COBRA1抗体的制备及在乳腺癌细胞中的特性研究 | 第39-50页 |
| 1 引言 | 第39页 |
| 2 结果 | 第39-46页 |
| ·COBRA1全长编码序列的PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·GST-COBRA1的诱导表达 | 第41页 |
| ·GST-COBRA1蛋白的纯化及其鉴定 | 第41页 |
| ·乳腺癌细胞株中COBRA1的mRNA表达水平的检测 | 第41-42页 |
| ·兔抗人COBRA1多克隆抗体制备 | 第42-44页 |
| ·COBRA1蛋白在乳腺癌细胞株中的表达分析 | 第44-45页 |
| ·COBRA1在乳腺癌细胞中的定位 | 第45页 |
| ·COBRA1与BRCA1的内源性相互作用 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| 4 结论 | 第48页 |
| 5 参考文献 | 第48-50页 |
| 第五部分 ERβ与COBRA1相互作用的研究 | 第50-60页 |
| 1 引言 | 第50页 |
| 2 结果 | 第50-54页 |
| ·COBRA1对ERβ转录活性的影响 | 第50-52页 |
| ·COBRA1和ERβ在体外的相互作用 | 第52-53页 |
| ·COBRA1和ERβ在体内的相互作用 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-55页 |
| 4 小结 | 第55-56页 |
| 5 参考文献 | 第56-60页 |
| 第六部分 总结 | 第60-61页 |
| 附录一: 攻读博士学位期间发表的文章目录 | 第61-63页 |
| 附录二:文献综述一 | 第63-78页 |
| 文献综述二 | 第71-78页 |
| 附录三: 发表的论著一 | 第78-91页 |
| 发表的论著二 | 第88-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
