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麦长管蚜G蛋白β和γ亚基的基因克隆及其相互作用蛋白的筛选

第一章 引言第1-27页
   ·G蛋白的基本结构和种类第13-14页
   ·G蛋白的调控循环第14页
   ·G蛋白βγ亚基第14-16页
     ·G蛋白βγ亚基的种类及组织分布第14-15页
     ·G蛋白β和γ亚基的基本结构特点第15页
     ·G蛋白β和γ亚基形成二聚体的能力第15-16页
     ·G蛋白βγ亚基与α亚基、受体和效应器的结合第16页
   ·G蛋白偶联的信号传导系统及各组分的结构和功能第16-18页
     ·G蛋白偶联受体(GPCRs)第17页
     ·G蛋白各亚基结构和功能关系第17-18页
     ·G蛋白主要效应器第18页
   ·G蛋白信号传导途径及网络化第18-20页
     ·Gs途径第19-20页
     ·Gi途径第20页
     ·Gq途径第20页
     ·G12和G13途径第20页
   ·小G蛋白超家族概述第20-21页
   ·昆虫G蛋白信号途径的研究进展第21-24页
     ·G蛋白偶联受体第21-22页
     ·G蛋白及其下游效应器第22页
     ·G蛋白在昆虫信号传导中的作用研究第22-24页
   ·酵母双杂交系统研究蛋白与蛋白之间的相互作用第24-26页
     ·酵母双杂交系统简介第24页
     ·酵母双杂交系统的应用第24-25页
     ·酵母双杂交系统的优点第25-26页
   ·研究的目的和意义第26-27页
第二章 麦长管蚜G蛋白Β和Γ亚基的基因克隆与组织分布第27-59页
   ·材料与方法第27-39页
     ·供试昆虫第27页
     ·培养基第27-28页
     ·主要试剂第28页
     ·仪器设备第28-29页
     ·试验技术路线图第29页
     ·总RNA的提取第29-30页
     ·cDNA的合成第30页
     ·引物的设计第30-32页
     ·RT-PCR反应第32-33页
     ·3′-RACE反应第33-34页
     ·5′-RACE反应第34-35页
     ·PCR和RACE产物的回收纯化第35-36页
     ·连接反应第36页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第36页
     ·转化大肠杆菌第36页
     ·菌落PCR鉴定阳性克隆第36-37页
     ·序列测定第37页
     ·对头、胸和腹部进行半定量RT-PCR第37-39页
   ·结果与分析第39-57页
     ·β亚基的基因克隆及序列分析第39-47页
     ·β亚基在不同组织及各虫期的转录水平第47-49页
     ·γ亚基的基因克隆及序列分析第49-55页
     ·γ亚基在不同组织及各虫期的转录水平第55-57页
   ·讨论第57-59页
     ·克隆的麦长管蚜β和γ亚基与其它物种的氨基酸同源性分析第57页
     ·β和γ亚基的结构与其功能关系第57页
     ·关于半定量RT-PCR方法的探讨第57-59页
第三章 双杂交筛选与麦长管蚜G蛋白Β和Γ亚基作用的蛋白第59-101页
   ·材料与方法第59-73页
     ·材料第59页
     ·试剂:第59-63页
     ·技术路线图第63-64页
     ·分别用麦长管蚜G蛋白β和γ亚基构建诱饵蛋白第64-67页
     ·构建cDNA文库第67-69页
     ·用构建好的诱饵蛋白筛选cDNA文库第69-72页
     ·酵母共转化法研究克隆的β和γ亚基之间的互作第72-73页
   ·结果与分析第73-98页
     ·诱饵蛋白的构建第73-75页
     ·cDNA文库的构建第75-76页
     ·用麦长管蚜G蛋白β亚基做诱饵蛋白筛选cDNA文库的结果第76-96页
     ·用麦长管蚜G蛋白γ亚基做诱饵筛选cDNA文库的结果第96-97页
     ·酵母双杂交研究克隆的G蛋白β与γ亚基之间的互作关系第97-98页
   ·讨论第98-101页
     ·对酵母双杂交试验结果的分析第98-99页
     ·关于酵母双杂交试验常见问题的探讨第99-100页
     ·下一步工作设想第100-101页
第四章 小G蛋白CDC42和肌动蛋白的基因克隆及序列分析第101-114页
   ·材料与方法第101-102页
     ·材料第101页
     ·方法第101-102页
   ·结果与分析第102-113页
     ·克隆了小G蛋白Cdc42全长cDNA序列第102-103页
     ·Cdc42在头、胸和腹部的转录水平第103页
     ·Cdc42在不同发育阶段的转录水平第103-104页
     ·小G蛋白Cdc42的生物信息学分析第104-109页
     ·克隆了麦长管蚜肌动蛋白基因的部分cDNA序列第109-113页
   ·讨论第113-114页
第五章 结论第114-117页
参考文献第117-124页
致谢第124-125页
作者简历第125页

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