| 引言 | 第1-8页 |
| 1 试验材料 | 第8-9页 |
| ·病毒、菌种、细胞与载体 | 第8页 |
| ·酶类和试剂盒 | 第8页 |
| ·培养基 | 第8页 |
| ·主要试剂 | 第8-9页 |
| ·扩增目的基因片段所用引物 | 第9页 |
| ·主要仪器设备 | 第9页 |
| 2 方法 | 第9-19页 |
| ·病毒培养 | 第9页 |
| ·PRRSV核衣壳蛋白基因的扩增(RT-PCR) | 第9-11页 |
| ·PRRS病毒RNA的提取 | 第9-10页 |
| ·PRRSV RNA的反转录(RT) | 第10页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第10-11页 |
| ·PCR产物的回收、纯化与鉴定 | 第11页 |
| ·pET-28a质粒的提取 | 第11-12页 |
| ·重组质粒的构建 | 第12-15页 |
| ·制备感受态细胞 | 第12-13页 |
| ·连接反应 | 第13-14页 |
| ·转化 | 第14页 |
| ·筛选重组质粒 | 第14页 |
| ·再连接转化 | 第14-15页 |
| ·表达菌的获得 | 第15页 |
| ·IPTG诱导表达 | 第15页 |
| ·表达产物的鉴定: | 第15-18页 |
| ·表达蛋白的提取 | 第15页 |
| ·表达产物蛋白的垂直电泳 | 第15-16页 |
| ·表达产物蛋白的western-blot | 第16-18页 |
| ·表达产物蛋白的western-blot--使用抗6-His抗体 | 第16-17页 |
| ·表达产物蛋白的western-blot--使用PRRS单抗 | 第17-18页 |
| ·目的表达蛋白的纯化 | 第18-19页 |
| ·细菌中蛋白质的纯化 | 第18-19页 |
| ·镍柱的重生 | 第19页 |
| ·纯化后蛋白的western-blot | 第19页 |
| 3 结果 | 第19-25页 |
| ·目的基因克隆结果 | 第19-22页 |
| ·双酶切鉴定重组质粒 | 第22-23页 |
| ·第二次转化后质粒的鉴定 | 第23页 |
| ·表达菌中质粒的鉴定 | 第23页 |
| ·最佳诱导条件的确定 | 第23-24页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第24-25页 |
| ·表达蛋白抗原性的鉴定 | 第25页 |
| 4 讨论 | 第25-26页 |
| 参考文献 | 第26-28页 |
| 综述 | 第28-57页 |