中文摘要 | 第1-12页 |
英文摘要 | 第12-14页 |
1 前言 | 第14-40页 |
1.1 植物抗病反应的分子机理 | 第14-24页 |
1.1.1 病原的致病作用 | 第15页 |
1.1.2 植物抗病性和抗病的遗传基础 | 第15-16页 |
1.1.3 植物的抗病基因 | 第16-18页 |
1.1.4 植物防卫反应的信号传导 | 第18-21页 |
1.1.5 防卫反应基因及其表达调控 | 第21-24页 |
1.2 植物病原菌致病过程中基因表达谱研究技术 | 第24-31页 |
1.2.1 基因表达的系列分析(SAGE) | 第25页 |
1.2.2 cDNA微阵列和DNA芯片技术 | 第25-26页 |
1.2.3 正向和反向遗传学研究 | 第26-27页 |
1.2.4 蛋白质组学的研究 | 第27页 |
1.2.5 EST技术及其应用 | 第27-29页 |
1.2.6 生物信息学的应用 | 第29-31页 |
1.3 DNA差减文库的构建和基因差异表达研究 | 第31-34页 |
1.3.1 磁珠辅助扣除技术(MAST) | 第31-32页 |
1.3.2 cDNA代表差异分析(cDNA RDA) | 第32页 |
1.3.3 抑制差减杂交法(SSH) | 第32-34页 |
1.4 大白菜软腐病研究进展 | 第34-37页 |
1.4.1 病原和发病症状 | 第35页 |
1.4.2 软腐病菌的侵染方式 | 第35-36页 |
1.4.3 软腐病发病过程中的寄主-病原菌互作 | 第36-37页 |
1.5 立题意义与技术路线 | 第37-40页 |
1.5.1 立题意义 | 第37-38页 |
1.5.2 技术路线 | 第38-40页 |
2 材料和方法 | 第40-57页 |
2.1 白菜软腐欧文氏菌的分离和鉴定 | 第40-43页 |
2.1.1 白菜软腐病细菌的分离 | 第40页 |
2.1.2 白菜软腐欧文氏菌的鉴定 | 第40-43页 |
2.2 白菜软腐病组织抑制差减杂交(SSH) cDNA文库的构建 | 第43-50页 |
2.2.1 材料与处理 | 第43-44页 |
2.2.2 白菜总RNA提取 | 第44页 |
2.2.3 mRNA的纯化 | 第44-45页 |
2.2.4 抑制差减杂交 | 第45-49页 |
2.2.5 PCR产物的纯化 | 第49页 |
2.2.6 感受态细胞的制备 | 第49-50页 |
2.2.7 转化 | 第50页 |
2.3 测序与分析 | 第50-51页 |
2.4 差异表达基因的反向Northern(Reverse Northern)分析 | 第51-57页 |
2.4.1 RNA提取和DNase处理 | 第51页 |
2.4.2 质粒DNA的提取 | 第51页 |
2.4.3 EST序列专一引物的设计与合成 | 第51-53页 |
2.4.4 探针的标记 | 第53-54页 |
2.4.5 探针标记效率的检测 | 第54-57页 |
3 结果与分析 | 第57-75页 |
3.1 白菜软腐病菌的分离与鉴定 | 第57-58页 |
3.2 RNA的提取和mRNA的纯化 | 第58-59页 |
3.3 差减杂交结果分析 | 第59-61页 |
3.4 白菜SSH cDNA文库的滴度 | 第61页 |
3.5 白菜SSH cDNA文库和序列分析结果 | 第61-62页 |
3.6 重叠群分析和功能注释 | 第62-73页 |
3.6.1 初级代谢相关基因 | 第62-63页 |
3.6.2 能量代谢相关基因 | 第63-64页 |
3.6.3 生物胁迫和非生物胁迫相关基因 | 第64页 |
3.6.4 信号传导相关基因 | 第64-65页 |
3.6.5 转录调控相关基因 | 第65页 |
3.6.6 次生代谢相关基因 | 第65-73页 |
3.7 白菜抗病基因同源序列Reverse Northern分析 | 第73-75页 |
4 讨论 | 第75-81页 |
4.1 SSH cDNA文库的质量 | 第75页 |
4.2 SSH cDNA文库在抗病相关基因表达谱研究中的优越性 | 第75-76页 |
4.3 基于SSH文库的EST测序量 | 第76页 |
4.4 白菜软腐病菌致病初期抗病反应的相关过程 | 第76-79页 |
4.4.1 抗病反应的信号传导途径 | 第77-78页 |
4.4.2 防卫反应基因的表达调控 | 第78页 |
4.4.3 防卫反应基因 | 第78-79页 |
4.4.4 次生代谢产物与植物的抗病反应 | 第79页 |
4.5 反向Northern验证结果 | 第79-80页 |
4.6 本实验今后的研究方向 | 第80-81页 |
5 结论 | 第81-82页 |
参考文献 | 第82-95页 |
附表 | 第95-126页 |
名词缩写 | 第126-127页 |
致谢 | 第127-128页 |
攻读学位期间发表的学术论文 | 第128页 |