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结球白菜软腐病菌致病过程中基因表达序列标签(EST)分析

中文摘要第1-12页
英文摘要第12-14页
1 前言第14-40页
 1.1 植物抗病反应的分子机理第14-24页
  1.1.1 病原的致病作用第15页
  1.1.2 植物抗病性和抗病的遗传基础第15-16页
  1.1.3 植物的抗病基因第16-18页
  1.1.4 植物防卫反应的信号传导第18-21页
  1.1.5 防卫反应基因及其表达调控第21-24页
 1.2 植物病原菌致病过程中基因表达谱研究技术第24-31页
  1.2.1 基因表达的系列分析(SAGE)第25页
  1.2.2 cDNA微阵列和DNA芯片技术第25-26页
  1.2.3 正向和反向遗传学研究第26-27页
  1.2.4 蛋白质组学的研究第27页
  1.2.5 EST技术及其应用第27-29页
  1.2.6 生物信息学的应用第29-31页
 1.3 DNA差减文库的构建和基因差异表达研究第31-34页
  1.3.1 磁珠辅助扣除技术(MAST)第31-32页
  1.3.2 cDNA代表差异分析(cDNA RDA)第32页
  1.3.3 抑制差减杂交法(SSH)第32-34页
 1.4 大白菜软腐病研究进展第34-37页
  1.4.1 病原和发病症状第35页
  1.4.2 软腐病菌的侵染方式第35-36页
  1.4.3 软腐病发病过程中的寄主-病原菌互作第36-37页
 1.5 立题意义与技术路线第37-40页
  1.5.1 立题意义第37-38页
  1.5.2 技术路线第38-40页
2 材料和方法第40-57页
 2.1 白菜软腐欧文氏菌的分离和鉴定第40-43页
  2.1.1 白菜软腐病细菌的分离第40页
  2.1.2 白菜软腐欧文氏菌的鉴定第40-43页
 2.2 白菜软腐病组织抑制差减杂交(SSH) cDNA文库的构建第43-50页
  2.2.1 材料与处理第43-44页
  2.2.2 白菜总RNA提取第44页
  2.2.3 mRNA的纯化第44-45页
  2.2.4 抑制差减杂交第45-49页
  2.2.5 PCR产物的纯化第49页
  2.2.6 感受态细胞的制备第49-50页
  2.2.7 转化第50页
 2.3 测序与分析第50-51页
 2.4 差异表达基因的反向Northern(Reverse Northern)分析第51-57页
  2.4.1 RNA提取和DNase处理第51页
  2.4.2 质粒DNA的提取第51页
  2.4.3 EST序列专一引物的设计与合成第51-53页
  2.4.4 探针的标记第53-54页
  2.4.5 探针标记效率的检测第54-57页
3 结果与分析第57-75页
 3.1 白菜软腐病菌的分离与鉴定第57-58页
 3.2 RNA的提取和mRNA的纯化第58-59页
 3.3 差减杂交结果分析第59-61页
 3.4 白菜SSH cDNA文库的滴度第61页
 3.5 白菜SSH cDNA文库和序列分析结果第61-62页
 3.6 重叠群分析和功能注释第62-73页
  3.6.1 初级代谢相关基因第62-63页
  3.6.2 能量代谢相关基因第63-64页
  3.6.3 生物胁迫和非生物胁迫相关基因第64页
  3.6.4 信号传导相关基因第64-65页
  3.6.5 转录调控相关基因第65页
  3.6.6 次生代谢相关基因第65-73页
 3.7 白菜抗病基因同源序列Reverse Northern分析第73-75页
4 讨论第75-81页
 4.1 SSH cDNA文库的质量第75页
 4.2 SSH cDNA文库在抗病相关基因表达谱研究中的优越性第75-76页
 4.3 基于SSH文库的EST测序量第76页
 4.4 白菜软腐病菌致病初期抗病反应的相关过程第76-79页
  4.4.1 抗病反应的信号传导途径第77-78页
  4.4.2 防卫反应基因的表达调控第78页
  4.4.3 防卫反应基因第78-79页
  4.4.4 次生代谢产物与植物的抗病反应第79页
 4.5 反向Northern验证结果第79-80页
 4.6 本实验今后的研究方向第80-81页
5 结论第81-82页
参考文献第82-95页
附表第95-126页
名词缩写第126-127页
致谢第127-128页
攻读学位期间发表的学术论文第128页

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