| 中文摘要 | 第1-17页 |
| 英文摘要 | 第17-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-58页 |
| 第一节 土槿皮乙酸药理作用研究进展 | 第20-22页 |
| 1.抗真菌作用 | 第20页 |
| 2.诱导凋亡 | 第20-21页 |
| 3.抗生育作用 | 第21页 |
| 4.抗血管生成作用 | 第21页 |
| 5.抗微管和周期阻滞作用 | 第21-22页 |
| 第二节 细胞凋亡及分子机制研究进展 | 第22-35页 |
| 一、细胞凋亡的特征 | 第22-24页 |
| 1.形态学和生物化学变化 | 第22-23页 |
| 2.凋亡与坏死的区别 | 第23-24页 |
| 二、细胞凋亡的一些调控因素 | 第24-31页 |
| 1.Caspase蛋白酶与细胞凋亡 | 第24-26页 |
| ·Caspase酶原的结构与分类 | 第24-25页 |
| ·Caspase的底物 | 第25-26页 |
| 2.Bcl-2家族成员在凋亡中的作用 | 第26-28页 |
| 3.MAPK家族与凋亡 | 第28-29页 |
| 4.细胞凋亡与周期阻滞 | 第29-31页 |
| 三、细胞凋亡的信号转导途径 | 第31-35页 |
| 1.死亡受体途径 | 第31-32页 |
| ·Fas信号途径 | 第31-32页 |
| ·TNFR信号途径 | 第32页 |
| ·DR3、DR4和DR5信号途径 | 第32页 |
| 2.线粒体途径 | 第32-34页 |
| 3.蛋白激酶C信号转导通路 | 第34-35页 |
| 第三节 细胞自噬及其分子机制的研究进展 | 第35-42页 |
| 一、自噬的分类与自噬体形成的分子基础 | 第35-39页 |
| 1.自噬的分类 | 第35-36页 |
| 2.自噬体的发生过程 | 第36-39页 |
| ·自噬的诱导 | 第36-37页 |
| ·自噬体的形成 | 第37-39页 |
| ·自噬体的运输、融合 | 第39页 |
| ·自噬体内再循环利用 | 第39页 |
| 二、自噬的信号调控 | 第39-40页 |
| 1.PI3K对自噬通路的调控 | 第39-40页 |
| 2.MAP-LC3在自噬中的功能 | 第40页 |
| 3.Bcl-2家族蛋白对自噬的调节 | 第40页 |
| 三、自噬与肿瘤 | 第40-42页 |
| 1.自噬与细胞周期 | 第41页 |
| 2.自噬与凋亡 | 第41-42页 |
| ·自噬与凋亡相互促进 | 第41-42页 |
| ·自噬与凋亡相互拮抗 | 第42页 |
| 第四节 细胞衰老及其分子机制研究 | 第42-46页 |
| 一、细胞衰老的特征和检验方法 | 第42页 |
| 二、研究细胞衰老的意义 | 第42-43页 |
| 三、细胞衰老的原因和机制研究 | 第43-44页 |
| 1.端粒与衰老 | 第43页 |
| 2.ROS与细胞衰老 | 第43页 |
| 3.DNA损伤与衰老 | 第43页 |
| 4.癌基因与衰老 | 第43-44页 |
| 5.其他因素 | 第44页 |
| 四、衰老的信号转到通路 | 第44页 |
| 五、细胞衰老与细胞周期 | 第44页 |
| 六、细胞衰老,凋亡与自噬 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-58页 |
| 第二章 土槿皮乙酸诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,自噬和衰老及对凋亡机制研究 | 第58-101页 |
| 第一节 土槿皮乙酸诱导人乳腺癌凋亡、自噬、衰老和M期周期阻滞 | 第58-84页 |
| 一、实验材料与方法 | 第58-66页 |
| 1.实验材料 | 第58-59页 |
| ·细胞 | 第58页 |
| ·药品与试剂 | 第58-59页 |
| ·仪器 | 第59页 |
| 2.实验方法 | 第59-66页 |
| ·土槿皮乙酸对MCF-7细胞生长抑制的影响 | 第59-60页 |
| ·细胞形态学变化的观察 | 第60页 |
| ·荧光染色 | 第60页 |
| ·细胞死亡方式的判断(LDH活力测定) | 第60-61页 |
| ·DNA片段化电泳 | 第61页 |
| ·流式细胞分析法 | 第61-62页 |
| ·细胞衰老的检测:SA-β-半乳糖苷酶检测法 | 第62页 |
| ·荧光显微镜和流式细胞仪分析MDC荧光染色 | 第62页 |
| ·Western印迹法 | 第62-66页 |
| ·统计分析 | 第66页 |
| 二、实验结果 | 第66-81页 |
| 1.土槿皮乙酸诱导MCF-7细胞死亡呈明显的时间和剂量依赖性 | 第66页 |
| 2.土槿皮乙酸对MCF-7细胞形态及细胞核的影响 | 第66-68页 |
| 3.乳酸脱氢酶方法(LDH)定量MCF-7细胞凋亡比率 | 第68页 |
| 4.土槿皮乙酸诱导MCF-7细胞自噬 | 第68-69页 |
| 5.土槿皮乙酸诱导MCF-7细胞衰老 | 第69-72页 |
| 6.土槿皮乙酸诱导MCF-7细胞细胞周期阻滞 | 第72页 |
| 7.MCF-7细胞有caspase-3的表达,但不被土槿皮乙酸激活 | 第72-75页 |
| 8.土槿皮乙酸降解细胞DNA修复蛋白PARP | 第75页 |
| 9.Fas途径不参与土槿皮乙酸诱导的MCF-7细胞凋亡 | 第75-79页 |
| 10.土槿皮乙酸上调p21和p53的表达 | 第79页 |
| 11.土槿皮乙酸诱导M期周期阻滞 | 第79-81页 |
| 三、讨论 | 第81-83页 |
| 四、小结 | 第83-84页 |
| 第二节 土槿皮乙酸诱导MCF-7细胞凋亡通过酪氨酸激酶,JNK和ERK | 第84-96页 |
| 一、实验材料与方法 | 第84-86页 |
| 1.实验材料 | 第84-85页 |
| ·细胞 | 第84页 |
| ·药品与试剂 | 第84-85页 |
| ·仪器 | 第85页 |
| 2.实验方法 | 第85-86页 |
| ·PAB对MCF-7细胞生长抑制的影响 | 第85页 |
| ·细胞形态学变化的观察 | 第85页 |
| ·细胞死亡方式的判断(LDH活力测定) | 第85页 |
| ·Western blot | 第85-86页 |
| 二、实验结果 | 第86-94页 |
| 1.土槿皮乙酸诱导MCF-7细胞凋亡,但Genistein和AG1024明显抑制土槿皮乙酸作用 | 第86页 |
| 2.SP600125降低土槿皮乙酸诱导的凋亡率 | 第86-87页 |
| 3.PD98059和SB203580对土槿皮乙酸诱导的凋亡的影响 | 第87-88页 |
| 4.土槿皮乙酸上调JNK和p-JNK的表达,却降低p-ERK的表达,对ERK,p38和p-p38的表达没有明显的作用 | 第88-93页 |
| 5.土槿皮乙酸通过激活MCF-7细胞的PTKs下调JNK和p-JNK的表达,上调p-ERK的表达 | 第93-94页 |
| 三、讨论 | 第94-95页 |
| 四、小结 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-101页 |
| 第三章 土槿皮乙酸诱导鼠纤维肉瘤L929自噬、衰老和M期周期阻滞 | 第101-144页 |
| 第—节 土槿皮乙酸诱导鼠纤维肉瘤L929细胞自噬和衰老 | 第101-115页 |
| 一、实验材料与方法 | 第101-105页 |
| 1.实验材料 | 第101-102页 |
| ·细胞 | 第102页 |
| ·药品与试剂 | 第102页 |
| ·仪器 | 第102页 |
| 2.实验方法 | 第102-105页 |
| ·土槿皮乙酸对L929细胞生长抑制的影响 | 第102页 |
| ·流式细胞仪分析MDC染色 | 第102-103页 |
| ·细胞死亡方式的判断(LDH活力测定) | 第103页 |
| ·荧光显微镜和流式细胞仪分析(MDC荧光染色) | 第103页 |
| ·罗丹明染色分析线粒体膜电位 | 第103页 |
| ·免疫沉淀法分析Beclin 1与Bcl-2蛋白的结合 | 第103-104页 |
| ·细胞衰老的检测:SA-β-半乳糖苷酶检测法 | 第104页 |
| ·Western印迹法 | 第104-105页 |
| ·统计分析 | 第105页 |
| 二、实验结果 | 第105-113页 |
| 1.土槿皮乙酸抑制L929细胞生长并增加MDC染色阳性率 | 第105页 |
| 2.土槿皮乙酸不诱导L929细胞凋亡,但与3-MA联用促进凋亡 | 第105页 |
| ·-MA抑制土槿皮乙酸诱导的L929细胞MDC染色阳性率增加 | 第105-108页 |
| 4.土槿皮乙酸对L929细胞Beclin 1和LC3表达的影响 | 第108-109页 |
| 5.土槿皮乙酸对L929细胞线粒体膜电位的影响 | 第109-110页 |
| 6.土槿皮乙酸上调L929细胞中的Bcl-2,Bax和Bcl-xl的表达 | 第110页 |
| 7.土槿皮乙酸抑制Bcl-2和Beclin 1的结合 | 第110-112页 |
| 8.土槿皮乙酸抑制Bax定位在线粒体,促进Bcl-xl和Bcl-2定位在线粒体 | 第112页 |
| 9.土槿皮乙酸诱导L929细胞衰老 | 第112-113页 |
| 三、讨论 | 第113-114页 |
| 四、小结 | 第114-115页 |
| 第二节 Caspase蛋白对土槿皮乙酸诱导鼠纤维肉瘤自噬的影响 | 第115-129页 |
| 一、实验材料与方法 | 第115-117页 |
| 1.实验材料 | 第115-116页 |
| ·细胞 | 第115页 |
| ·药品与试剂 | 第115-116页 |
| ·仪器 | 第116页 |
| 2.实验方法 | 第116-117页 |
| ·Caspase抑制剂对土槿皮乙酸诱导的L929细胞生长抑制的影响 | 第116页 |
| ·土槿皮乙酸对L929细胞形态的影响 | 第116页 |
| ·细胞死亡方式的判断(LDH活力测定) | 第116页 |
| ·流式分析MDC荧光染色 | 第116页 |
| ·流式分析细胞周期 | 第116-117页 |
| ·Western印迹法 | 第117页 |
| ·统计分析 | 第117页 |
| 二、实验结果 | 第117-128页 |
| 1.Caspase 8参与土槿皮乙酸诱导的L929细胞自噬 | 第117页 |
| 2.Caspase 9不参与土槿皮乙酸诱导的L929细胞自噬 | 第117-118页 |
| 3.Caspase 3对土槿皮乙酸诱导L929细胞自噬的影响 | 第118-125页 |
| 4.Caspase家族抑制剂与土槿皮乙酸联用,促进凋亡抑制自噬 | 第125-128页 |
| 三、讨论 | 第128页 |
| 四、小结 | 第128-129页 |
| 第三节 PKC参与土槿皮乙酸诱导的M期细胞周期阻滞 | 第129-140页 |
| 一、实验材料与方法 | 第129-131页 |
| 1.实验材料 | 第129-130页 |
| ·细胞 | 第129页 |
| ·药品与试剂 | 第129-130页 |
| ·仪器 | 第130页 |
| 2.实验方法 | 第130-131页 |
| ·土槿皮乙酸与PKC抑制剂联用后对L929细胞生长抑制的影响 | 第130页 |
| ·光学显微镜观察L929细胞形态变化 | 第130页 |
| ·细胞死亡方式的判断(LDH活力测定) | 第130页 |
| ·流式细胞分析法 | 第130页 |
| ·Hoechst染色 | 第130-131页 |
| ·Western印迹法 | 第131页 |
| ·统计分析 | 第131页 |
| 二、实验结果 | 第131-139页 |
| 1.土槿皮乙酸抑制细胞生长,但与PKC抑制剂联用后促进细胞死亡 | 第131-132页 |
| 2.与PKC抑制剂联用土槿皮乙酸诱导L929细胞凋亡小体的产生 | 第132-133页 |
| 3.土槿皮乙酸诱导四倍体细胞的产生,但staurosporine降低4倍体细胞的比率 | 第133-134页 |
| 4.土槿皮乙酸诱导多核细胞的出现,但与staurosporine联用后,多核细胞减少 | 第134-135页 |
| 5.Cyclin B1参与土槿皮乙酸诱导的L929细胞M期周期阻滞 | 第135-136页 |
| 6.土槿皮乙酸上调cdc2诱导M期周期阻滞 | 第136-137页 |
| 7.土槿皮乙酸与staurosporine联用对cyclinB1和cdc2的影响 | 第137页 |
| 8.P21和p53参与土槿皮乙酸诱导的L929细胞的M期周期阻滞 | 第137-139页 |
| 三、讨论 | 第139-140页 |
| 四、小结 | 第140页 |
| 参考文献 | 第140-144页 |
| 致谢 | 第144-145页 |
| 个人简历 | 第145页 |
| 论文发表情况 | 第145-147页 |
| 缩略语说明 | 第147-152页 |
| 附录 | 第152-160页 |
