| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| ·MicroRNAs简介 | 第12-15页 |
| ·MicroRNAs的发现 | 第12页 |
| ·MicroRNAs生物合成及其作用机制 | 第12-14页 |
| ·MicroRNAs的调节功能 | 第14-15页 |
| ·家蚕microRNAs研究现状 | 第15页 |
| ·Let-7简介 | 第15-17页 |
| ·Let-7研究现状 | 第15-16页 |
| ·Let-7的靶基因研究 | 第16-17页 |
| ·家蚕let-7研究进展 | 第17页 |
| ·家蚕的发育 | 第17-18页 |
| ·家蚕发育 | 第18页 |
| ·家蚕蛹期变态的的调控机理 | 第18页 |
| ·Ras研究现状 | 第18-22页 |
| ·Ras及家族成员简介 | 第18-19页 |
| ·Ras下游信号通路 | 第19-20页 |
| ·家蚕Ras基因 | 第20-22页 |
| 第二章 引言 | 第22-24页 |
| ·研究背景及意义 | 第22页 |
| ·主要研究内容 | 第22页 |
| ·技术路线 | 第22-24页 |
| 第三章 上调、下调let-7对化蛹的影响及相关分子检测 | 第24-40页 |
| ·材料与试剂 | 第24-28页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·实验试剂 | 第24-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·主要溶液配制 | 第26-28页 |
| ·方法与步骤 | 第28-33页 |
| ·家蚕let-7上调和下调 | 第28页 |
| ·Northern blot检测microRNAs及Ras表达量 | 第28-31页 |
| ·定量PCR检测Ras表达量 | 第31-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-38页 |
| ·预蛹期上调和下调let-7 | 第33-35页 |
| ·检测microRNAs表达量 | 第35-37页 |
| ·检测Ras基因表达量 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 Ras基因克隆、原核表达及蛋白纯化 | 第40-62页 |
| ·材料与试剂 | 第40-44页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·实验试剂 | 第40-41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·主要溶液配制 | 第41-44页 |
| ·方法与步骤 | 第44-52页 |
| ·RNA提取及反转录 | 第44-45页 |
| ·目的基因克隆 | 第45-47页 |
| ·表达载体构建 | 第47-48页 |
| ·原核表达 | 第48-49页 |
| ·蛋白纯化 | 第49-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-61页 |
| ·Ras基因克隆 | 第52页 |
| ·Ras基因序列分析 | 第52-55页 |
| ·表达载体构建 | 第55-57页 |
| ·原核表达 | 第57-58页 |
| ·蛋白纯化 | 第58-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| 第五章 Let-7与Ras调控关系验证 | 第62-78页 |
| ·材料与试剂 | 第62-64页 |
| ·实验材料 | 第62页 |
| ·实验试剂 | 第62-63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·主要溶液配制 | 第63-64页 |
| ·方法与步骤 | 第64-67页 |
| ·提取蛋白 | 第64页 |
| ·Western blot检测 | 第64-65页 |
| ·构建质粒 | 第65-66页 |
| ·预测Ras 3’UTR的let-7结合位点 | 第66页 |
| ·转染细胞 | 第66-67页 |
| ·检测双荧光素酶活性 | 第67页 |
| ·结果与分析 | 第67-76页 |
| ·Western blot检测let-7对Ras蛋白丰度的影响 | 第67-68页 |
| ·Ras 3’UTR克隆 | 第68-71页 |
| ·预测Ras 3’UTR的let-7结合位点 | 第71-73页 |
| ·Ras 3’UTR报告基因载体及let-7阳性对照载体构建 | 第73-75页 |
| ·Let-7对连接Ras 3’UTR的报告基因的影响 | 第75-76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| 第六章 综合与结论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 在读期间发表论文及参加课题 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
