| 内容提要 | 第1-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-34页 |
| 第一节 Ⅱ糖尿病概述 | 第10-15页 |
| 一、Ⅱ型糖尿病的发病机制 | 第10-12页 |
| 二、Ⅱ型糖尿病药物研究进展 | 第12-15页 |
| 第二节 GLP-1 及其类似物Exendin-4 | 第15-24页 |
| 一、胰高血糖素样肽-1 | 第15页 |
| 二、Exendin-4 | 第15-18页 |
| 三、Exendin-4 的结构 | 第18-19页 |
| 四、Exendin-4 与GLP-1 受体间的相互作用 | 第19-24页 |
| 第三节 Exendin-4 对胰岛β-细胞改善的作用机制 | 第24-28页 |
| 一、葡萄糖对胰岛β-细胞的影响 | 第24-26页 |
| 二、Exendin-4 对胰岛β-细胞的改善 | 第26-28页 |
| 第四节 Exendin-4 作为糖尿病药物的研发及其临床应用 | 第28-30页 |
| 第五节 GLP-1R 为靶标的Ⅱ型糖尿病药物的筛选 | 第30-32页 |
| 一、利用肽库筛选得到的GLP-1R 激活剂 | 第31页 |
| 二、利用Exendin-4 突变体库筛选GLP-1R 激活剂 | 第31页 |
| 三、利用非肽类化合物样品库筛选GLP-1R 激活剂 | 第31-32页 |
| 第六节 本文设计思想 | 第32-34页 |
| 第二章 材料与方法 | 第34-56页 |
| 第一节 Exendin-4 及结构模拟物体外活性、稳定性与结构关系的研究 | 第34-38页 |
| 一、材料与试剂 | 第34-35页 |
| 二、溶液配制 | 第35页 |
| 三、主要仪器 | 第35-36页 |
| 四、实验方法 | 第36-38页 |
| 1. Exendin-4 及其结构模拟物的固相合成、纯化与鉴定 | 第36页 |
| 2. Exendin-4 及其结构模拟物体外活性测定 | 第36-37页 |
| 3. Exendin-4 及其结构模拟物体外稳定性测定 | 第37页 |
| 4. Exendin-4 及其结构模拟物光谱分析 | 第37-38页 |
| 第二节 Exendin-4 的12 肽模拟物的筛选、合成与活性测定 | 第38-44页 |
| 一、材料与试剂 | 第38页 |
| 二、溶液配制 | 第38-39页 |
| 三、主要仪器 | 第39页 |
| 四、实验方法 | 第39-44页 |
| 1. Exendin-4 的12 肽模拟物的筛选 | 第39-41页 |
| 2. 噬菌斑的扩增 | 第41页 |
| 3. 噬菌体单链DNA 的提取 | 第41-42页 |
| 4. 噬菌体滴度测定 | 第42-43页 |
| 5. Exendin-4 的12 肽模拟物的合成、纯化以及鉴定 | 第43页 |
| 6. Exendin-4 的12 肽模拟物的活性检测 | 第43页 |
| 7. Ex-12PA 体外稳定性检测 | 第43-44页 |
| 8. Ex-12PA 体内降血糖活性测定 | 第44页 |
| 第三节 葡萄糖毒性下Exendin-4 及Ex-12PA 对β-细胞保护机制的研究. | 第44-47页 |
| 一、材料与试剂 | 第44-45页 |
| 二、溶液配制 | 第45页 |
| 三、仪器设备 | 第45页 |
| 四、实验方法 | 第45-47页 |
| 1. RINm-5F 细胞葡萄糖毒性相关基因的检测 | 第45-46页 |
| 2. Caspase-3 活性测定 | 第46-47页 |
| 第四节 Exendin-4 及模拟物活性测定方法的研究 | 第47-56页 |
| 一、材料与试剂 | 第47页 |
| 二、溶液配制 | 第47-48页 |
| 三、主要仪器 | 第48-49页 |
| 四、实验方法 | 第49-56页 |
| 1. MTT 检测方法的改进 | 第49页 |
| 2. nGLP-1R 结合活性检测方法的建立 | 第49-56页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第56-110页 |
| 第一节 Exendin-4 及结构模拟物体外活性、稳定性与结构关系的研究 | 第56-78页 |
| 一、Exendin-4 结构模拟物设计 | 第56-58页 |
| 二、Exendin-4 及其结构模拟物合成、纯化及其鉴定 | 第58-63页 |
| 三、Exendin-4 及结构模拟物体外活性测定 | 第63-65页 |
| 四、Exendin-4 及结构模拟物体外稳定性测定 | 第65-71页 |
| 五、Exendin-4 及结构模拟物光谱分析 | 第71-75页 |
| 六、讨论 | 第75-77页 |
| 七、小结 | 第77-78页 |
| 第二节 Exendin-4 的12 肽模拟物筛选、合成与活性测定 | 第78-92页 |
| 一、Exendin-4 的12 肽模拟物的筛选 | 第78-90页 |
| 1. 亲和筛选 | 第78页 |
| 2. 噬菌体阳性克隆单链的提取及测序 | 第78-79页 |
| 3. 亲和短肽序列分析 | 第79-80页 |
| 4. Exendin-4 的12 肽模拟物的合成、纯化及鉴定 | 第80-86页 |
| 5. Exendin-4 的12 肽模拟物体外活性检测 | 第86-88页 |
| 6. Ex-12PA 体外稳定性检测 | 第88页 |
| 7. Ex-12PA 体内降血糖活性测定 | 第88-90页 |
| 二、讨论 | 第90-91页 |
| 三、小结 | 第91-92页 |
| 第三节 Exendin-4 及Ex-12PA 对β-细胞葡萄糖毒性保护机理的研究 | 第92-99页 |
| 一、葡萄糖毒性下抑制RINm-5F 细胞凋亡的检测 | 第92-95页 |
| 1. bcl-2 和bax 基因的检测 | 第92-94页 |
| 2. Caspase-3 活性的检测 | 第94-95页 |
| 二、葡萄糖毒性下改善RINm-5F 细胞功能相关基因的检测 | 第95-96页 |
| 三、讨论 | 第96-99页 |
| 四、小结 | 第99页 |
| 第四节 Exendin-4 及模拟物活性测定方法的研究 | 第99-108页 |
| 一、MTT 检测方法的改进 | 第100-102页 |
| 1. 铺板前细胞活力计数 | 第100-101页 |
| 2. 铺板细胞数目的确定 | 第101-102页 |
| 二、nGLP-1R 结合活性检测方法的建立 | 第102-106页 |
| 1. 原核系统nGLP-1R 的表达 | 第102-105页 |
| 2. 靶分子与nGLP-1R 结合活性的测定 | 第105-106页 |
| 三、讨论 | 第106-107页 |
| 四、小结 | 第107-108页 |
| 第五节 结论 | 第108-110页 |
| 参考文献 | 第110-123页 |
| 博士期间研究成果 | 第123-124页 |
| 中文摘要 | 第124-128页 |
| Abstract | 第128-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
| 作者简历 | 第134页 |
