| 目录 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 前言 | 第8-15页 |
| hTFPI-2的基因结构与组成 | 第8页 |
| hTFPI-2的产生和分布 | 第8-9页 |
| hTFPI-2的功能与作用机制 | 第9-11页 |
| hTFPI-2的结构-功能关系 | 第11-12页 |
| 参考文献 | 第12-15页 |
| 第一章 hTFPI-2/KD1的光谱结构分析,温度对其结构功能的影响研究 | 第15-35页 |
| ·引言 | 第15-19页 |
| ·利用傅立叶红外光谱研究KD1的结构及其结构随温度的变化 | 第19-24页 |
| ·实验材料和仪器 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-20页 |
| ·KD1室温下的红外光谱解析(各二级结构含量) | 第20-23页 |
| ·KD1的红外光谱随温度的变化(二阶导数谱:解析结构随温度的变化) | 第23-24页 |
| ·拉曼光谱研究KD1的结构及其S-S键的稳定性 | 第24-27页 |
| ·实验材料和仪器 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24页 |
| ·KD1室温下的拉曼光谱解析 | 第24-25页 |
| ·KD1的S-S键热稳定性分析 | 第25-27页 |
| ·利用圆二色谱研究KD1的结构及其结构随温度的变化 | 第27-30页 |
| ·实验材料和仪器 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27页 |
| ·hTFPI-2/KD1的圆二色谱随温度的变化(解析结构随温度的变化) | 第27-30页 |
| ·hTFPI-2/KD1抑制纤溶酶活性实验 | 第30页 |
| ·实验材料和仪器 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30页 |
| ·热处理对KD1抑制纤溶酶活性的影响 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 参考文献 | 第32-35页 |
| 第二章 hTFPI-2/KD3C的表达、纯化及鉴定 | 第35-55页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·实验材料和仪器 | 第35-37页 |
| ·菌种与质粒 | 第35-36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·仪器 | 第36页 |
| ·引物合成与DNA序列测定 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-42页 |
| ·构建毕赤酵母表达质粒rpPIC9K-hTFPI-2/KD3C | 第37页 |
| ·制备及转化感受态大肠杆菌DH5α | 第37页 |
| ·表达质粒rpPIC9K-hTFPI-2/KD3C的扩增及提取 | 第37-38页 |
| ·制备感受态毕赤酵母GS115 | 第38页 |
| ·电转化毕赤酵母GS115 | 第38页 |
| ·筛选多拷贝阳性酵母转化子 | 第38页 |
| ·鉴定转化子表型 | 第38-39页 |
| ·在有机培养基中诱导表达hTFPI-2/KD3C | 第39页 |
| ·在低盐培养基中发酵表达hTFPI-2/KD3C | 第39-40页 |
| ·hTFPI-2/KD3C的纯化 | 第40页 |
| ·hTFPI-2/KD3C的Tricine-SDS-PAGE电泳及Western Blot鉴定 | 第40-42页 |
| ·高效液相色谱分析纯化后的hTFPI-2/KD3C的纯度 | 第42页 |
| ·质谱分析hTPFI-2/KD3C的分子量 | 第42页 |
| ·实验结果: | 第42-50页 |
| ·表达质粒rpPIC9K-hTFPI-2/KD3C的构建 | 第42-44页 |
| ·多拷贝阳性转化子的筛选和鉴定 | 第44页 |
| ·hTFPI-2/KD3C的纯化和鉴定 | 第44-47页 |
| ·高效液相色谱分析纯化后的hTFPI-2/KD3C的纯度 | 第47-48页 |
| ·质谱分析hTPFI-2/KD3C的分子量 | 第48-50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| 参考文献 | 第53-55页 |
| 第三章 hTFPI-2/KD3C的初步结构—功能分析 | 第55-64页 |
| ·引言 | 第55-56页 |
| ·hTFPI-2/KD3C的~1H NMR谱图 | 第56-58页 |
| ·样品制备: | 第56页 |
| ·一维核磁共振实验 | 第56页 |
| ·一维~1H核磁共振图谱中的信息 | 第56-58页 |
| ·hTFPI-2/KD3C与hTFPI-1/KD3C的相似性对比 | 第58页 |
| ·hTFPI-2/KD3C与肝素的结合 | 第58-59页 |
| ·hTFPI-1/KD3C的启示 | 第58-59页 |
| ·利用肝素亲和层析柱分离hTFPI-2/KD3C | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-62页 |
| 参考文献 | 第62-64页 |
| 缩写表 | 第64-65页 |
| 硕士期间发表论文 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
