| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-26页 |
| 第二章 CAV VP1和VP2在毕赤酵母中的共表达 | 第26-36页 |
| 1 材料 | 第27-29页 |
| ·菌株和质粒 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·仪器设备 | 第27-28页 |
| ·溶液配制 | 第28-29页 |
| 2 实验方法 | 第29-31页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备及转化 | 第29页 |
| ·重组酵母菌株的PCR鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组酵母基因组DNA的提取 | 第29页 |
| ·PCR扩增鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组酵母菌株的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·对诱导表达蛋白的SDS-PAGE试验 | 第30页 |
| ·对诱导表达蛋白的Dot-ELISA检测 | 第30-31页 |
| ·对诱导表达蛋白的免疫印迹试验 | 第31页 |
| 3 结果 | 第31-34页 |
| ·重组酵母菌株的PCR筛选 | 第31-32页 |
| ·重组菌株诱导表达鉴定 | 第32-34页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE分析 | 第32-33页 |
| ·表达蛋白的Dot-ELISA分析 | 第33-34页 |
| ·表达蛋白的免疫印迹分析 | 第34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 重组酵母基因工程菌株发酵工艺的优级化 | 第36-46页 |
| 1 材料 | 第36-38页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·溶液配制 | 第36-38页 |
| ·主要仪器设备 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-41页 |
| ·发酵液中菌密度的测定 | 第38-39页 |
| ·发酵液中目的蛋白浓度的测定 | 第39页 |
| ·酵母菌株的诱导表达 | 第39-40页 |
| ·酵母菌株在摇瓶中的小量培养诱导表达 | 第39页 |
| ·酵母菌株在发酵罐中的高密度发酵表达 | 第39-40页 |
| ·优化发酵表达的条件 | 第40页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第40页 |
| ·发酵表达产物的浓缩 | 第40-41页 |
| ·洗脱液的Dot-ELISA检测 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-44页 |
| ·发酵罐中发酵条件的优化 | 第41页 |
| ·酵母菌在发酵罐中的诱导培养 | 第41-43页 |
| ·发酵液样品的SDS-PAGE电泳结果 | 第43页 |
| ·洗脱液的Dot-ELISA检测结果 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 重组酵母菌株发酵产物的免疫保护性分析 | 第46-53页 |
| 1. 材料 | 第46-47页 |
| ·菌株、血清、蛋白 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·检测用雏鸡、细胞和病毒 | 第46-47页 |
| ·溶液配制 | 第47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47页 |
| 2. 方法 | 第47-49页 |
| ·疫苗的制备 | 第47页 |
| ·安全性试验 | 第47-48页 |
| ·效力试验 | 第48页 |
| ·血清的酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第48页 |
| ·肝脏的PCR检测 | 第48页 |
| ·血清的间接免疫荧光检测 | 第48页 |
| ·雏鸡的病理剖检 | 第48-49页 |
| 3. 结果 | 第49-51页 |
| ·重组蛋白的安全试验 | 第49页 |
| ·重组蛋白的免疫效力试验 | 第49-51页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第49-50页 |
| ·病理学检验 | 第50页 |
| ·PCR检测 | 第50-51页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第51页 |
| 4. 讨论 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 致谢 | 第58页 |