| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-28页 |
| ·防御素的研究进展 | 第17-23页 |
| ·防御素的种类及其分子结构特征 | 第17-19页 |
| ·防御素的生物学功能 | 第19-21页 |
| ·防御素的抗菌机理 | 第21-23页 |
| ·真菌防御素Plectasin 的研究进展 | 第23-25页 |
| ·Plectasin 的结构 | 第23-24页 |
| ·Plectasin 的生物学功能 | 第24-25页 |
| ·Plectasin 的基因工程表达 | 第25页 |
| ·相关研究方法综述 | 第25-27页 |
| ·防御素构效关系研究方法 | 第25-26页 |
| ·抑菌机理研究方法 | 第26页 |
| ·防御素的基因工程表达 | 第26-27页 |
| ·本研究思路、目的和意义 | 第27-28页 |
| ·本研究思路 | 第27页 |
| ·本研究目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 Plectasin 在大肠杆菌中融合表达与纯化 | 第28-48页 |
| ·引言 | 第28-29页 |
| ·实验材料 | 第29-31页 |
| ·质粒与菌株 | 第29页 |
| ·DNA 修饰酶类与其他生化试剂 | 第29页 |
| ·基因合成及DNA 测序 | 第29页 |
| ·培养基及缓冲液等试剂配制 | 第29-30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-35页 |
| ·Plectasin 基因序列设计、合成及重组表达载体构建 | 第31页 |
| ·重组表达菌株E. coli BL21（DE3）pET32a/Plectasin 的构建 | 第31-32页 |
| ·融合蛋白诱导表达 | 第32-33页 |
| ·融合蛋白纯化 | 第33页 |
| ·Xa 因子裂解融合蛋白 | 第33页 |
| ·柱上切割融合蛋白 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE 电泳和Tricine-SDS-PAGE 电泳 | 第33-34页 |
| ·琼脂扩散抑菌试验 | 第34页 |
| ·重组Plectasin 的凝胶过滤层析分离 | 第34-35页 |
| ·重组Plectasin 的反相高效液相色谱RP-HPLC 进一步分离 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-46页 |
| ·Plectasin 密码子的优化设计 | 第35-36页 |
| ·重组表达载体构建及转化筛选 | 第36页 |
| ·融合蛋白基因表达条件的优化 | 第36-38页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| ·Xa 因子液相酶切切割融合蛋白及切割产物的活性检测 | 第39-40页 |
| ·Xa 因子固相柱上切割融合蛋白 | 第40-42页 |
| ·Superdex peptide 10/30 凝胶过滤层析分离 | 第42-44页 |
| ·反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化 | 第44-46页 |
| ·讨论与结论 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第46页 |
| ·结论 | 第46-48页 |
| 第三章 重组 Plectasin 的性质与功能研究 | 第48-60页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-51页 |
| ·Plectasin 的折叠 | 第49页 |
| ·Plectasin 的氧化、还原和热处理 | 第49-50页 |
| ·抑菌实验 | 第50页 |
| ·阳离子对Plectasin 抗菌活性的影响 | 第50-51页 |
| ·溶血实验 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-58页 |
| ·Plectasin 的折叠 | 第51-53页 |
| ·Plectasin 二硫键的功能 | 第53-55页 |
| ·Plectasin 的抗菌活性 | 第55-56页 |
| ·离子对Plectasin 的抗菌活性的影响 | 第56-57页 |
| ·Plectasin 的溶血性 | 第57-58页 |
| ·讨论与结论 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·结论 | 第59-60页 |
| 第四章 Plectasin 二硫键的构效关系探索 | 第60-68页 |
| ·引言 | 第60页 |
| ·生物信息学工具及实验材料 | 第60-61页 |
| ·生物信息学工具 | 第60-61页 |
| ·实验材料 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-63页 |
| ·Plectasin 及其二硫键突变体的物理化学特性分析及结构预测 | 第61页 |
| ·Plectasin 及其二硫键突变体基因设计合成、重组表达载体构建及鉴定 | 第61-62页 |
| ·Plectasin 及其二硫键突变体表达载体的电转化与筛选 | 第62-63页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第63页 |
| ·抑菌试验 | 第63页 |
| ·结果 | 第63-67页 |
| ·Plectasin 及其二硫键突变体的理化特性参数计算 | 第63-64页 |
| ·Plectasin 及其二硫键突变体的二级结构特征预测 | 第64-65页 |
| ·琼脂扩散法监测Plectasin 及其二硫键突变体诱导表达产物抑菌活性 | 第65-67页 |
| ·讨论与结论 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第67页 |
| ·结论 | 第67-68页 |
| 第五章 Plectasin 的抑菌机理初步研究 | 第68-73页 |
| ·引言 | 第68页 |
| ·实验材料 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-69页 |
| ·扫描电镜成像 | 第68-69页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第69页 |
| ·结果 | 第69-71页 |
| ·Plectasin 对金黄色葡萄球菌细胞形态学的影响 | 第69-70页 |
| ·Plectasin 与DNA 相互作用 | 第70-71页 |
| ·讨论与结论 | 第71-73页 |
| ·讨论 | 第71-72页 |
| ·结论 | 第72-73页 |
| 第六章 结论 | 第73-76页 |
| 参考文献 | 第76-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 作者简历 | 第87-88页 |
