| 摘要 | 第1-5页 |
| SUMMARY | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第7-12页 |
| 第一章 新孢子虫病研究进展 | 第12-23页 |
| 1 病原及分类地位 | 第12页 |
| 2 新孢子虫的生活史 | 第12-13页 |
| 3 新孢子病的危害 | 第13-14页 |
| 4 新孢子虫病的诊断方法 | 第14-19页 |
| ·临床诊断 | 第14页 |
| ·病原学诊断 | 第14-15页 |
| ·超微结构检查 | 第14页 |
| ·病理组织学检查 | 第14-15页 |
| ·病原的分离培养 | 第15页 |
| ·免疫学诊断 | 第15-18页 |
| ·免疫组织化学染色 | 第15页 |
| ·凝集试验 | 第15-16页 |
| ·免疫印迹 | 第16页 |
| ·间接荧光抗体试验 | 第16页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第16-17页 |
| ·免疫色谱法 | 第17-18页 |
| ·分子生物学诊断 | 第18-19页 |
| ·间接原位 PCR | 第18页 |
| ·检测 Nc-5 基因的 PCR | 第18页 |
| ·单管套式 PCR | 第18-19页 |
| 5 新孢子虫病的防治 | 第19-20页 |
| ·药物治疗 | 第19页 |
| ·免疫预防 | 第19-20页 |
| ·活疫苗和灭活疫苗 | 第19-20页 |
| ·重组载体疫苗 | 第20页 |
| ·DNA 疫苗 | 第20页 |
| 6 目前新孢子虫用于检测和免疫原的主要抗原 | 第20-22页 |
| ·NcSRS2（Nc-p43） | 第20-21页 |
| ·NcSAG1 (Nc-p36） | 第21页 |
| ·NcDG1 | 第21页 |
| ·NcDG2 | 第21页 |
| ·NcGRA2 | 第21-22页 |
| 7 预防措施 | 第22-23页 |
| 第二章 NCSRS2 基因的扩增、克隆及表达 | 第23-44页 |
| 1 材料和方法 | 第23-34页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·虫株 | 第23页 |
| ·新孢子虫阳性血清 | 第23-24页 |
| ·菌种与质粒 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·溶液 | 第24-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-34页 |
| ·新孢子虫基因组DNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·NcSRS2 序列生物特性分析 | 第27页 |
| ·引物的设计与合成 | 第27页 |
| ·SRS2 基因的PCR 扩增 | 第27-28页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第28页 |
| ·重组质粒pMDTM19-dNcSRS2 的构建 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·重组质粒的转化 | 第29页 |
| ·重组阳性质粒的鉴定 | 第29-31页 |
| ·重组阳性质粒序列分析 | 第31页 |
| ·pET32a-NcSRS2t 表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌 BL21 中的表达 | 第32-33页 |
| ·目的蛋白表达的分布检测 | 第33页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第33页 |
| ·表达产物的Western Blotting 检测 | 第33-34页 |
| 2 结果 | 第34-42页 |
| ·NcSRS2 基因表达蛋白的分析 | 第34-35页 |
| ·NcSRS2t 基因的克隆 | 第35页 |
| ·重组质粒 PMD19T-NcSRS2t 的鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组质粒PMD19T-NcSRS2t 的PCR 鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组质粒PMD19T-NcSRS2t 的酶切鉴定 | 第36页 |
| ·序列测定与分析 | 第36-38页 |
| ·重组表达载体pET32a-NcSRS2t 的构建与鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pET32a-NcSRS2t 的PCR 鉴定 | 第38页 |
| ·重组质粒pET32a-NcSRS2t 的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒在表达菌BL21 中表达与SDS-PAGE 分析 | 第39-40页 |
| ·目的基因在 37℃和 25℃低温条件下表达的分布 | 第40-41页 |
| ·融合蛋白的纯化结果 | 第41页 |
| ·表达产物的Western Blotting 检测 | 第41-42页 |
| 3 结论与讨论 | 第42-44页 |
| ·NcSRS2 基因及表达产物的特点 | 第42页 |
| ·NcSRS2 基因阶段表达片段的选择 | 第42-44页 |
| 第三章 新孢子虫 ELISA 检测方法的建立 | 第44-53页 |
| 1 材料与方法 | 第44-46页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·包被抗原与新孢子虫阴阳性血清 | 第44页 |
| ·新孢子虫阳性血清、阴性血清 | 第44页 |
| ·溶液 | 第44页 |
| ·试验方法 | 第44-46页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第44-45页 |
| ·间接 ELISA 各种试剂工作浓度、反应条件的确定 | 第45-46页 |
| ·最佳抗原包被浓度及血清稀释度的确定 | 第45页 |
| ·最佳封闭条件的选择 | 第45-46页 |
| ·抗原最佳包被时间的确定 | 第46页 |
| ·血清作用时间的确定 | 第46页 |
| ·底物作用时间的选择 | 第46页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第46页 |
| 2. 结果 | 第46-51页 |
| ·重组蛋白浓度的测定结果 | 第46页 |
| ·ELISA 反应条件的优化 | 第46-49页 |
| ·抗原最佳包被浓度与血清最佳稀释度的确定 | 第46-47页 |
| ·最佳封闭液时间的确定 | 第47-48页 |
| ·抗原最佳包被时间的确定 | 第48页 |
| ·血清最佳作用时间的确定 | 第48-49页 |
| ·底物作用时间的确定 | 第49页 |
| ·阴阳性临界值的判定 | 第49-50页 |
| ·间接 ELISA 检测程序 | 第50-51页 |
| 3 讨论与小结 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60-61页 |
| 导师简介 | 第61页 |
