| 摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 前言 | 第16-36页 |
| 1 传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)及其衣壳结构的研究 | 第16-33页 |
| ·传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的研究概况 | 第16-21页 |
| ·IHHNV的发现 | 第16页 |
| ·对虾传染性皮下及造血组织坏死病(IHHN)的病症及组织病理学 | 第16-18页 |
| ·IHHNV的病毒特性及分类地位 | 第18-19页 |
| ·IHHNV的感染宿主及传播途径 | 第19-20页 |
| ·IHHNV的地理分布及其致病性 | 第20-21页 |
| ·IHHNV与WSSV感染的相关性研究 | 第21页 |
| ·传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的分离 | 第21-22页 |
| ·传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的基因组研究 | 第22-28页 |
| ·已公布的IHHNV序列 | 第22-23页 |
| ·IHHNV(加利福尼亚分离株)基因组的结构分析 | 第23页 |
| ·福建株IHHNV基因组序列的测定和分析 | 第23-28页 |
| ·传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)衣壳蛋白结构的研究 | 第28-33页 |
| ·二十面体病毒衣壳结构的研究概况 | 第28-29页 |
| ·衣壳蛋白质的四级结构-壳粒 | 第29-31页 |
| ·二十面体病毒衣壳结构的理论研究进展 | 第31-32页 |
| ·维持和稳定二十面体病毒衣壳结构的主要因素 | 第32页 |
| ·细小病毒衣壳蛋白自组装成病毒样颗粒的研究 | 第32-33页 |
| 2 本论文研究的内容、目的和意义 | 第33-36页 |
| 第一部分 传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)衣壳蛋白组装机理的初步研究 | 第36-47页 |
| 1 前言 | 第36页 |
| 2 材料与方法 | 第36-40页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-40页 |
| ·可溶性重组衣壳蛋白的Ni-NTA亲和层析纯化 | 第37-38页 |
| ·电镜观察EDTA和DTT处理的VLPs | 第38页 |
| ·非还原型SDS-PAGE分析 | 第38页 |
| ·电镜观察VLPs超速离心后的上清 | 第38-39页 |
| ·blue-native PAGE分析 | 第39-40页 |
| ·Superdex G-200凝胶过滤柱层析 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-44页 |
| ·电镜观察EDTA和DTT对IHHNV-VLPs的影响 | 第40-41页 |
| ·IHHNV-VLP的二硫键分析 | 第41-43页 |
| ·CP自组装机理的研究 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| 第二部分 IHHNV荧光病毒样颗粒的构建 | 第47-60页 |
| 1 前言 | 第47页 |
| 2 材料与方法 | 第47-52页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-52页 |
| ·pET-28-CP-EGFP重组表达质粒的构建 | 第48-49页 |
| ·重组质粒pET-28-CP-EGFP和pET-His-CP在E.coli BL-21中的共表达 | 第49-50页 |
| ·共转化单菌落涂片镜检 | 第50页 |
| ·可溶性表达产物fVLPs的亲和层析纯化 | 第50页 |
| ·Western blot分析 | 第50-51页 |
| ·电镜观察可溶性重组衣壳蛋白 | 第51页 |
| ·可溶性重组衣壳蛋白的免疫金标电镜分析 | 第51-52页 |
| ·fVLPs与对虾血细胞的结合实验 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-57页 |
| ·pET-28-CP-EGFP重组质粒的构建 | 第52-53页 |
| ·共转化菌的显微镜观察 | 第53-54页 |
| ·可溶性表达产物fVLPs的纯化和Western Blot分析 | 第54-55页 |
| ·VLPs和fVLPs的免疫金标电镜分析 | 第55-56页 |
| ·fVLPs的对虾血细胞感染实验 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 第三部分 传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)衣壳蛋白组装成的病毒样颗粒包裹核酸的初步研究 | 第60-72页 |
| 1 前言 | 第60页 |
| 2 材料与方法 | 第60-65页 |
| ·材料 | 第60-62页 |
| ·方法 | 第62-65页 |
| ·重组衣壳粒包裹核酸提取及分析 | 第62页 |
| ·Total RNA的提取 | 第62-63页 |
| ·DIG标记探针的制备 | 第63页 |
| ·Northern杂交 | 第63-64页 |
| ·指数级富集的配体系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX) | 第64-65页 |
| 3 结果 | 第65-70页 |
| ·VLPs内包裹核酸的分析 | 第65-66页 |
| ·CP,AMP_r和EGFP基因的PCR扩增 | 第66-67页 |
| ·northern杂交 | 第67-68页 |
| ·与CP结合的DNA序列的筛选 | 第68-69页 |
| ·SELEX筛选结果的测序分析 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| 第四部分 论文总结 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-91页 |
| 缩略词 | 第91-92页 |
| 附录 主要仪器设备、常规溶液配制和常规实验方法 | 第92-102页 |
| 1 主要仪器设备 | 第92-93页 |
| 2 常用溶液及培养基的配制 | 第93-97页 |
| 3 常规实验方法 | 第97-102页 |
| 硕士期间发表的文章 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
