中文摘要 | 第1-10页 |
ABSTRACT | 第10-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-31页 |
1 CHROMO结构域的发现 | 第12页 |
2 CHROMO结构域的结构及功能 | 第12-18页 |
·CHROMO结构域的结构 | 第13-16页 |
·CHROMO结构域的功能 | 第16-18页 |
3 含有CHROMO结构域的蛋白家族 | 第18-21页 |
·含有CHROMO结构域和CSD结构域的HP1型蛋白 | 第19-20页 |
·含有单个CHROMO结构域的Polycomb型蛋白 | 第20-21页 |
·含有两个经典CHROMO结构域的蛋白 | 第21页 |
·含有三个CHROMO结构域的蛋白质 | 第21页 |
4 纤毛虫中含有CHROMO结构域的蛋白及本课题的意义 | 第21-23页 |
·纤毛虫中含有CHROMO结构域的蛋白 | 第22-23页 |
·本课题研究材料八肋游仆虫及本课题的研究意义 | 第23页 |
参考文献 | 第23-31页 |
第二章 八肋游仆虫中ECD1基因的克隆及序列分析 | 第31-48页 |
1 材料 | 第31-33页 |
·菌株和质粒 | 第31页 |
·主要的酶及生化试剂 | 第31-32页 |
·寡聚核苷酸引物的设计 | 第32页 |
·主要试剂的配制 | 第32-33页 |
·主要实验仪器 | 第33页 |
2 实验方法 | 第33-39页 |
·八肋游仆虫细胞的培养 | 第33页 |
·八肋游仆虫大核DNA及小核DNA的提取 | 第33页 |
·八肋游仆虫总RNA的提取及cDNA的合成 | 第33-36页 |
·PCR扩增和测序 | 第36-39页 |
3 结果 | 第39-43页 |
·八肋游仆虫总RNA的提取 | 第39页 |
·ECD1基因序列的克隆 | 第39-40页 |
·ECD1基因序列的分析及比对 | 第40-41页 |
·ECD1基因拟编码的蛋白序列分析 | 第41页 |
·Ecd1蛋白CHROMO结构域的聚类分析 | 第41-43页 |
4 讨论 | 第43-45页 |
参考文献 | 第45-48页 |
第三章 八肋游仆虫His_6-Ecd1蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第48-61页 |
1 材料 | 第48-50页 |
·主要实验设备 | 第48页 |
·菌株和质粒 | 第48页 |
·寡聚核苷酸引物设计 | 第48页 |
·主要酶及生化试剂 | 第48-50页 |
2 实验方法 | 第50-55页 |
·八肋游仆虫ECD1基因开放阅读框(ORF)的克隆 | 第50页 |
·重组表达质粒pRSETc-ECD1的构建 | 第50-53页 |
·融合蛋白His_6-Ecd1的表达及纯化 | 第53-55页 |
3 实验结果 | 第55-58页 |
·八肋游仆虫总RNA的提取及ECD1基因ORF的克隆 | 第56页 |
·重组表达质粒pRSETc-ECD1的构建 | 第56页 |
·融合蛋白His_6-Ecd1的表达及纯化 | 第56-57页 |
·融合蛋白His_6-Ecd1的Western blotting分析 | 第57-58页 |
4 讨论 | 第58-59页 |
参考文献 | 第59-61页 |
第四章 Ecd1蛋白多克隆抗体的制备及其定位分析 | 第61-79页 |
1 材料 | 第61-64页 |
·实验动物 | 第61页 |
·菌株及质粒 | 第61页 |
·主要实验设备及小型器具 | 第61页 |
·主要生化试剂 | 第61-62页 |
·寡聚核苷酸引物设计 | 第62页 |
·主要试剂的配制 | 第62-64页 |
2 实验方法 | 第64-71页 |
·抗原的制备 | 第64页 |
·融合蛋白His_6-Ecd1多克隆抗体的制备 | 第64页 |
·ELISA检测抗体的效价 | 第64-65页 |
·八肋游仆虫总蛋白的提取 | 第65页 |
·八肋游仆虫蛋白提取物的Wesren blotting分析 | 第65-66页 |
·八肋游仆虫Ecd1蛋白的定位分析 | 第66-71页 |
3 实验结果 | 第71-75页 |
·融合蛋白His_6-Ecd1抗体的制备及滴度测定 | 第72页 |
·抗体的特异性检测 | 第72页 |
·八肋游仆虫Ecd1蛋白的定位分析 | 第72-75页 |
4 讨论 | 第75-76页 |
参考文献 | 第76-79页 |
小结与展望 | 第79-81页 |
附录 | 第81-84页 |
致谢 | 第84-85页 |