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八肋游仆虫ECD1基因的克隆与功能分析

中文摘要第1-10页
ABSTRACT第10-12页
第一章 文献综述第12-31页
 1 CHROMO结构域的发现第12页
 2 CHROMO结构域的结构及功能第12-18页
   ·CHROMO结构域的结构第13-16页
   ·CHROMO结构域的功能第16-18页
 3 含有CHROMO结构域的蛋白家族第18-21页
   ·含有CHROMO结构域和CSD结构域的HP1型蛋白第19-20页
   ·含有单个CHROMO结构域的Polycomb型蛋白第20-21页
   ·含有两个经典CHROMO结构域的蛋白第21页
   ·含有三个CHROMO结构域的蛋白质第21页
 4 纤毛虫中含有CHROMO结构域的蛋白及本课题的意义第21-23页
   ·纤毛虫中含有CHROMO结构域的蛋白第22-23页
   ·本课题研究材料八肋游仆虫及本课题的研究意义第23页
 参考文献第23-31页
第二章 八肋游仆虫中ECD1基因的克隆及序列分析第31-48页
 1 材料第31-33页
   ·菌株和质粒第31页
   ·主要的酶及生化试剂第31-32页
   ·寡聚核苷酸引物的设计第32页
   ·主要试剂的配制第32-33页
   ·主要实验仪器第33页
 2 实验方法第33-39页
   ·八肋游仆虫细胞的培养第33页
   ·八肋游仆虫大核DNA及小核DNA的提取第33页
   ·八肋游仆虫总RNA的提取及cDNA的合成第33-36页
   ·PCR扩增和测序第36-39页
 3 结果第39-43页
   ·八肋游仆虫总RNA的提取第39页
   ·ECD1基因序列的克隆第39-40页
   ·ECD1基因序列的分析及比对第40-41页
   ·ECD1基因拟编码的蛋白序列分析第41页
   ·Ecd1蛋白CHROMO结构域的聚类分析第41-43页
 4 讨论第43-45页
 参考文献第45-48页
第三章 八肋游仆虫His_6-Ecd1蛋白的表达、纯化及鉴定第48-61页
 1 材料第48-50页
   ·主要实验设备第48页
   ·菌株和质粒第48页
   ·寡聚核苷酸引物设计第48页
   ·主要酶及生化试剂第48-50页
 2 实验方法第50-55页
   ·八肋游仆虫ECD1基因开放阅读框(ORF)的克隆第50页
   ·重组表达质粒pRSETc-ECD1的构建第50-53页
   ·融合蛋白His_6-Ecd1的表达及纯化第53-55页
 3 实验结果第55-58页
   ·八肋游仆虫总RNA的提取及ECD1基因ORF的克隆第56页
   ·重组表达质粒pRSETc-ECD1的构建第56页
   ·融合蛋白His_6-Ecd1的表达及纯化第56-57页
   ·融合蛋白His_6-Ecd1的Western blotting分析第57-58页
 4 讨论第58-59页
 参考文献第59-61页
第四章 Ecd1蛋白多克隆抗体的制备及其定位分析第61-79页
 1 材料第61-64页
   ·实验动物第61页
   ·菌株及质粒第61页
   ·主要实验设备及小型器具第61页
   ·主要生化试剂第61-62页
   ·寡聚核苷酸引物设计第62页
   ·主要试剂的配制第62-64页
 2 实验方法第64-71页
   ·抗原的制备第64页
   ·融合蛋白His_6-Ecd1多克隆抗体的制备第64页
   ·ELISA检测抗体的效价第64-65页
   ·八肋游仆虫总蛋白的提取第65页
   ·八肋游仆虫蛋白提取物的Wesren blotting分析第65-66页
   ·八肋游仆虫Ecd1蛋白的定位分析第66-71页
 3 实验结果第71-75页
   ·融合蛋白His_6-Ecd1抗体的制备及滴度测定第72页
   ·抗体的特异性检测第72页
   ·八肋游仆虫Ecd1蛋白的定位分析第72-75页
 4 讨论第75-76页
 参考文献第76-79页
小结与展望第79-81页
附录第81-84页
致谢第84-85页

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