| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 引言 | 第13-32页 |
| 1 奶牛子宫内膜炎的危害 | 第13-14页 |
| 2 子宫内膜炎的病因分析 | 第14-17页 |
| ·生理状态原因 | 第14页 |
| ·子宫的物理屏障系统与产后子宫内膜的损伤、助产消毒不严 | 第14-15页 |
| ·免疫系统的功能的变化 | 第15-16页 |
| ·疾病方面及内分泌原因 | 第16页 |
| ·饲养管理不当 | 第16页 |
| ·遗传因素 | 第16页 |
| ·与胎次及季节的关系 | 第16-17页 |
| ·应激因素 | 第17页 |
| 3 奶牛子宫内膜炎的病原菌、传统的细菌鉴定方法及菌群动力学变化 | 第17-18页 |
| ·奶牛子宫内膜炎的传统鉴定方法 | 第17页 |
| ·引起奶牛子宫内膜炎的病原菌 | 第17-18页 |
| ·菌群动力学变化 | 第18页 |
| 4 奶牛子宫内膜炎的分类与诊断 | 第18-20页 |
| ·急性卡他性或脓性卡他性子宫内膜炎 | 第18-19页 |
| ·急性纤维蛋白性子宫内膜炎 | 第19页 |
| ·坏死性子宫内膜炎 | 第19页 |
| ·隐性子宫内膜炎 | 第19页 |
| ·慢性卡他性子宫内膜炎 | 第19-20页 |
| ·慢性卡他性脓性子宫内膜炎 | 第20页 |
| ·慢性脓性子宫内膜炎 | 第20页 |
| 5 奶牛子宫内膜炎的治疗 | 第20-24页 |
| ·子宫内疗法 | 第20-21页 |
| ·应用抗生素全身疗法 | 第21页 |
| ·中药疗法 | 第21-22页 |
| ·生物学疗法 | 第22-23页 |
| ·激素疗法 | 第23页 |
| ·干燥疗法 | 第23-24页 |
| ·激光疗法 | 第24页 |
| 6 国外研究现状 | 第24-29页 |
| ·母牛子宫局部免疫\内分泌与子宫免疫的关系及子宫内膜炎的免疫调控和免疫治疗 | 第24-28页 |
| ·子宫局部免疫系统 | 第25页 |
| ·激素对子宫及其炎症的免疫调节 | 第25-26页 |
| ·子宫内膜的炎的非特异性及特异性免疫 | 第26-28页 |
| ·16S rRNA技术在细菌鉴定中的应用 | 第28-29页 |
| ·rRNA基因 | 第28-29页 |
| ·16S rRNA鉴定方法 | 第29页 |
| 7 奶牛子宫内膜炎疫苗的研究 | 第29-30页 |
| 8 本课题研究的目的和意义 | 第30-32页 |
| 实验一 奶牛子宫内膜炎致病菌的16S rRNA序列鉴定 | 第32-49页 |
| 1 材料与方法 | 第32-41页 |
| ·材料 | 第32-34页 |
| ·试验动物 | 第32页 |
| ·细菌培养基及各种试剂 | 第32-33页 |
| ·主要试剂的配制 | 第33-34页 |
| ·主要仪器与设备 | 第34页 |
| ·菌种 | 第34页 |
| ·奶牛子宫内膜炎致病菌的分离及初步鉴定 | 第34-35页 |
| ·试验操作步骤 | 第35-40页 |
| ·试验菌株模板DNA的提取 | 第35-36页 |
| ·试验菌株16S rRNA基因的PCR扩增、克隆测序 | 第36-40页 |
| ·细菌16S rRNA鉴定、同源性分析与系统发育树的构建 | 第40-41页 |
| 2 结果 | 第41-47页 |
| ·细菌革兰氏染色的结果 | 第41-43页 |
| ·各菌株16S rRNA基因PCR扩增电泳结果 | 第43页 |
| ·16S rRNA克隆后的BamHⅠ和HindⅢ双酶切结果 | 第43-44页 |
| ·各菌株16S rRNA基因BLAST比对结果 | 第44-46页 |
| ·奶牛子宫内膜炎致病菌16S rRNA基因系统发育树的构建 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-48页 |
| 4 结论 | 第48-49页 |
| 试验二 金黄色葡萄球菌血浆凝固酶基因的克隆表达及生物活性分析 | 第49-61页 |
| 1 材料与方法 | 第49-56页 |
| ·材料 | 第49-51页 |
| ·菌株和质粒 | 第49-50页 |
| ·主要试剂 | 第50-51页 |
| ·主要仪器与设备 | 第51页 |
| ·试验菌株模板DNA的提取 | 第51页 |
| ·coa基因的扩增 | 第51-52页 |
| ·引物设计 | 第51-52页 |
| ·coa基因的扩增体系及循环参数 | 第52页 |
| ·PCR扩增产物的检测 | 第52页 |
| ·目的片段的回收纯化及克隆 | 第52页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第52页 |
| ·coa基因与克隆载体的连接 | 第52页 |
| ·感受态细胞的制备(BL21)、转化及蓝白斑筛选 | 第52页 |
| ·单克隆细菌的培养、重组质粒的提取、鉴定及测序 | 第52-53页 |
| ·单克隆细菌的培养、重组质粒的提取、鉴定 | 第52-53页 |
| ·测序 | 第53页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第53页 |
| ·pET32a+/coa表达质粒的转化及鉴定 | 第53-54页 |
| ·coa在大肠杆菌中的表达及SDS-PAGE分析 | 第54页 |
| ·亲和层析法分离纯化目的蛋白 | 第54-55页 |
| ·纯化蛋白质的纯度及定量检测 | 第55页 |
| ·表达产物的生物活性分析 | 第55-56页 |
| 2 结果 | 第56-59页 |
| ·coa的PCR扩增结果及序列测定和分析 | 第56页 |
| ·重组表达质粒的构建与鉴定 | 第56-57页 |
| ·coa基因在大肠杆菌中的表达及SDS-PAGE分析 | 第57-58页 |
| ·Coa蛋白的定量检测 | 第58-59页 |
| ·Coa蛋白的生物活性分析 | 第59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第73页 |
