| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-27页 |
| ·植物萜类物质的代谢研究 | 第15-23页 |
| ·植物萜类物质概述 | 第15-17页 |
| ·植物萜类代谢途径主要关键酶的研究 | 第17-23页 |
| ·鲨烯环氧酶的研究概述 | 第23-25页 |
| ·鲨烯环氧酶(SE)简介 | 第23-24页 |
| ·鲨烯环氧酶基因的研究进展 | 第24-25页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| ·本研究的研究内容和技术路线 | 第26-27页 |
| 第2章 鲨烯环氧酶基因的克隆及生物信息学分析 | 第27-47页 |
| ·材料与仪器 | 第27-29页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·菌株与质粒 | 第27-28页 |
| ·实验试剂 | 第28页 |
| ·主要培养基及试剂配制 | 第28页 |
| ·引物及测序 | 第28页 |
| ·仪器 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-36页 |
| ·龙牙楤木总 RNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·双链 cDNA 的合成 | 第30-31页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·PCR 扩增及电泳检测 | 第31-32页 |
| ·回收目的片段 | 第32-33页 |
| ·目的产物与 pGM-T 载体的连接 | 第33页 |
| ·制备大肠杆菌 Top10 感受态细胞（CaCl2法） | 第33页 |
| ·热激法转化 | 第33-34页 |
| ·质粒的提取 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的 PCR 鉴定 | 第35页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·测序 | 第36页 |
| ·生物信息学分析 | 第36页 |
| ·结果分析 | 第36-45页 |
| ·高质量总 RNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·目的基因获得 | 第37-38页 |
| ·目的片段的回收、连接、转化、重组质粒的酶切和 PCR 鉴定 | 第38页 |
| ·龙牙楤木 SE 基因的测序结果 | 第38页 |
| ·龙牙楤木鲨烯环氧酶基因的结构分析 | 第38-41页 |
| ·鲨烯环氧酶生物信息学分析 | 第41-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第3章 龙牙楤木 GAPDH 的克隆及 AeSE 表达分析 | 第47-58页 |
| ·材料与仪器 | 第47-48页 |
| ·植物材料 | 第47页 |
| ·菌株和表达载体 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47-48页 |
| ·主要试剂及培养基的配制 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-52页 |
| ·龙牙楤木总 RNA 的提取 | 第48页 |
| ·双链 cDNA 的合成 | 第48页 |
| ·GAPDH 基因的克隆 | 第48-49页 |
| ·目的片段的回收、与 pGM-T 载体的连接、重组质粒的转化和提取 | 第49页 |
| ·重组质粒的 PCR 鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第50页 |
| ·重组质粒的测序 | 第50页 |
| ·GAPDH 基因 cDNA 序列及氨基酸序列的分析 | 第50页 |
| ·龙牙楤木的各个器官（侧根、茎、叶、花）总 RNA 的提取 | 第50页 |
| ·各个器官总 RNA 反转录成 cDNA | 第50页 |
| ·Real-time qRT-PCR 引物的设计 | 第50-51页 |
| ·引物特异性和灵敏性的检测 | 第51页 |
| ·Real-time qRT-PCR 扩增 | 第51-52页 |
| ·表达分析 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-56页 |
| ·GAPDH 序列的 RT-PCR | 第52-53页 |
| ·pGM-T-GAPDH 载体的构建 | 第53页 |
| ·GAPDH 序列的分析 | 第53-54页 |
| ·预扩增 | 第54页 |
| ·特异扩增产物的确定 | 第54-55页 |
| ·Real-time qRT-PCR 结果 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| ·Real-time qRT-PCR | 第56页 |
| ·GAPDH 基因部分序列的克隆 | 第56-57页 |
| ·表达量结果分析 | 第57-58页 |
| 第4章 AeSE 转化烟草的研究 | 第58-75页 |
| ·材料与仪器 | 第58-61页 |
| ·植物材料 | 第58页 |
| ·菌株和表达载体 | 第58页 |
| ·试剂 | 第58-59页 |
| ·主要试剂及培养基的配制 | 第59-61页 |
| ·主要仪器 | 第61页 |
| ·方法 | 第61-69页 |
| ·龙牙楤木总 RNA 的提取 | 第61页 |
| ·双链 cDNA 的合成 | 第61-62页 |
| ·目的基因的扩增 | 第62页 |
| ·目的片段的回收、pGM-T 载体的连接、重组质粒的转化和提取 | 第62页 |
| ·重组质粒的 PCR 鉴定 | 第62-63页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第63页 |
| ·重组质粒的测序 | 第63页 |
| ·AeSE 植物表达载体的构建 | 第63-65页 |
| ·pCAMBIA3301-AeSE 转化农杆菌 | 第65-66页 |
| ·烟草无菌苗的获得 | 第66-67页 |
| ·农杆菌介导基因转化烟草（叶盘法） | 第67-68页 |
| ·转基因烟草的分子检测 | 第68-69页 |
| ·结果与分析 | 第69-73页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第69页 |
| ·烟草无菌苗的制备 | 第69-70页 |
| ·叶盘转化法 | 第70-71页 |
| ·转基因烟草的分子检测 | 第71-73页 |
| ·讨论 | 第73-75页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第73页 |
| ·烟草遗传转化体系 | 第73-75页 |
| 第5章 转 AeSS 基因烟草 T1代检测 | 第75-84页 |
| ·材料与仪器 | 第75-76页 |
| ·植物材料 | 第75页 |
| ·试剂 | 第75页 |
| ·主要试剂及培养基的配制 | 第75-76页 |
| ·主要仪器 | 第76页 |
| ·方法 | 第76-80页 |
| ·卡那霉素对转基因烟草 T0代种子的筛选 | 第76-77页 |
| ·转基因烟草 T1代 DNA 的提取 | 第77页 |
| ·转基因 T1烟草 PCR 检测 | 第77页 |
| ·转基因 T1烟草 PCR-Southern 检测（地高辛法） | 第77-80页 |
| ·结果与分析 | 第80-82页 |
| ·转 AeSS 基因 T0代种子表型分析 | 第80页 |
| ·卡那霉素对转基因 T0代种子的筛选 | 第80-81页 |
| ·PCR 及 PCR-Southern 检测 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-84页 |
| 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-94页 |
| 作者简介及科研成果 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
