| 摘要 | 第1-4页 |
| Summary | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-16页 |
| 1 CSFV 的研究现状 | 第7-11页 |
| ·CSFV 的结构及特性 | 第7-8页 |
| ·CSFV 基因组及编码蛋白 | 第8页 |
| ·流行病学 | 第8-9页 |
| ·猪瘟的实验室诊断 | 第9-10页 |
| ·猪瘟的防制 | 第10-11页 |
| 2 E~(rns) 蛋白的研究现状 | 第11-13页 |
| ·E~(rns) 蛋白的结构 | 第11页 |
| ·E~(rns) 蛋白的抗原性 | 第11-12页 |
| ·E~(rns) 蛋白的RNase 活性 | 第12-13页 |
| 3 猪瘟单克隆抗体应用研究进展 | 第13-14页 |
| ·猪瘟单克隆抗体在猪瘟鉴别诊断方面的应用 | 第13页 |
| ·猪瘟单克隆抗体在猪瘟病毒结构研究中的应用 | 第13-14页 |
| 4 毕赤酵母外源基因表达系统特点 | 第14页 |
| 5 表达的载体pPIC9K | 第14-15页 |
| 6 研究目的和意义 | 第15-16页 |
| 第二章 E~(rns)蛋白在毕赤酵母中的表达以及间接ELISA 检测方法的建立 | 第16-31页 |
| 1 实验材料 | 第16-17页 |
| ·质粒、菌株 | 第16页 |
| ·生化试剂 | 第16页 |
| ·酶类及核酸、蛋白Marker | 第16-17页 |
| ·检测血清 | 第17页 |
| ·主要培养基及溶液 | 第17页 |
| 2 实验方法 | 第17-24页 |
| ·重组表达载体E~(rns)-pPIC9K 的构建 | 第17-18页 |
| ·转化大肠杆菌JM109(E.coli) 感受态细胞 | 第18-20页 |
| ·酵母的转化与鉴定 | 第20-21页 |
| ·重组表达载体E~(rns)-pPIC9K 在毕赤酵母中的表达及表达产物的检测 | 第21-23页 |
| ·间接ELISA 检测E~(rns) 抗体方法的建立 | 第23-24页 |
| 3 结果 | 第24-29页 |
| ·E~(rns) 基因扩增产物的鉴定 | 第24页 |
| ·E~(rns)-pPIC9K 阳性重组质粒的筛选 | 第24-26页 |
| ·E~(rns)-pPIC9K 重组酵母菌株的筛选及PCR 鉴定 | 第26页 |
| ·E~(rns) 基因表达产物的SDS-PAGE 分析及Western-blot 检测 | 第26-27页 |
| ·E~(rns) 蛋白表达分析 | 第27页 |
| ·间接ELISA 检测方法的确定 | 第27-29页 |
| 4 讨论 | 第29-31页 |
| ·表达系统 | 第29-30页 |
| ·表达条件 | 第30页 |
| ·关于间接ELISA 检测方法 | 第30-31页 |
| 第三章 E~(rns)蛋白单克隆抗体制备 | 第31-40页 |
| 1 实验材料 | 第31-32页 |
| ·蛋白、细胞与病毒 | 第31页 |
| ·实验动物 | 第31页 |
| ·主要试剂和溶液 | 第31-32页 |
| 2 实验方法 | 第32-36页 |
| ·动物免疫 | 第32页 |
| ·免疫效价检测 | 第32页 |
| ·细胞融合 | 第32-33页 |
| ·杂交瘤细胞的选择培养 | 第33页 |
| ·特异性抗体检测 | 第33-34页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化 | 第34页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存 | 第34页 |
| ·单克隆抗体的腹水制备 | 第34-35页 |
| ·腹水的纯化(饱和硫酸铵沉淀法) | 第35页 |
| ·单克隆抗体特性鉴定 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-38页 |
| ·小鼠免疫后血清抗体效价检测效果 | 第36页 |
| ·杂交瘤细胞系的建立及部分特性鉴定结果 | 第36-38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-48页 |
| 附录：主要试剂、溶液及培养基配制 | 第48-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简介 | 第52-53页 |
| 导师简介 | 第53-54页 |
