| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Summary | 第4-5页 |
| 缩略语 | 第5-9页 |
| 第一部分 文献综述 | 第9-31页 |
| 第一章 猪圆环病毒感染及相关疾病 | 第9-21页 |
| 1 猪圆环病毒感染及危害 | 第9页 |
| 2 猪圆环病毒病流行状况和分布 | 第9-11页 |
| ·猪圆环病毒病在世界上的流行分布 | 第9-11页 |
| ·我国猪圆环病毒病的流行分布 | 第11页 |
| 3 猪圆环病毒病致病机理 | 第11-15页 |
| ·猪圆环病毒感染途径 | 第11-12页 |
| ·致病机制 | 第12-14页 |
| ·PCV 对淋巴细胞的影响 | 第14-15页 |
| ·PCV 对细胞因子的影响 | 第15页 |
| 4 临床症状和病理变化 | 第15-16页 |
| 5 与PCV2 感染相关的疾病 | 第16-18页 |
| ·断奶仔猪多系统衰竭综合症 | 第16-17页 |
| ·猪皮炎肾病综合征 | 第17页 |
| ·猪繁殖障碍 | 第17页 |
| ·猪A2 型先天性震颤 | 第17-18页 |
| ·猪呼吸道病复合征 | 第18页 |
| ·猪增生性和坏死性肺炎 | 第18页 |
| 6 猪圆环病毒疫苗研究进展 | 第18-20页 |
| 7 猪圆环病毒病防治策略 | 第20-21页 |
| 第二章 猪圆环病毒研究进展 | 第21-31页 |
| 1 猪圆环病毒的发现与命名 | 第21页 |
| 2 猪圆环病毒的分类地位 | 第21-22页 |
| 3 猪圆环病毒的形态学特征 | 第22-23页 |
| 4 猪圆环病毒的物理化学特性 | 第23页 |
| 5 猪圆环病毒培养特性 | 第23页 |
| 6 猪圆环病毒的分子生物学特征 | 第23-28页 |
| ·猪圆环病毒的基因组学特点 | 第23-25页 |
| ·猪圆环病毒的复制与转录 | 第25-26页 |
| ·主要ORFs 及其编码蛋白 | 第26-28页 |
| ·主要的ORFs | 第26页 |
| ·Rep 蛋白 | 第26-27页 |
| ·Cap 蛋白 | 第27-28页 |
| 7 猪圆环病毒的检测技术 | 第28-31页 |
| ·猪圆环病毒抗原的检测方法 | 第28-29页 |
| ·病毒的分离及其电镜观察 | 第28页 |
| ·PCR 检测技术 | 第28-29页 |
| ·免疫组织化学试验 | 第29页 |
| ·核酸探针及其原位杂交技术 | 第29页 |
| ·猪圆环病毒抗体检测技术 | 第29-31页 |
| ·间接免疫荧光技术 | 第29-30页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第30页 |
| ·免疫过氧化物酶单层细胞试验 | 第30-31页 |
| 第二部分 试验研究 | 第31-64页 |
| 第三章 PCV2兰州分离株ORF2片段的序列 分析 | 第31-47页 |
| 1 材料 | 第31-34页 |
| ·病料 | 第31页 |
| ·细胞与菌株 | 第31-32页 |
| ·共用引物 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·溶液配制 | 第32-34页 |
| ·DNA 提取所用试剂及溶液 | 第32页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用试剂及溶液 | 第32-33页 |
| ·病毒分离培养所需试剂及培养基 | 第33页 |
| ·细菌培养和重组质粒筛选主要用试剂及培养基 | 第33-34页 |
| ·主要实验仪器 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-39页 |
| ·PK-15 细胞的复苏 | 第34页 |
| ·病料细胞毒的提取 | 第34-35页 |
| ·病毒的培养 | 第35页 |
| ·引物设计与合成 | 第35页 |
| ·病毒总DNA 的提取 | 第35-36页 |
| ·基因组特定片段PCR 扩增反应 | 第36页 |
| ·电泳检测 | 第36页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第36-37页 |
| ·回收后的PCR 产物与pGEM-T Easy 载体的连接 | 第37页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第37-38页 |
| ·小量重组质粒DNA 的提取和双酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·序列测定 | 第39页 |
| ·9 株分离株ORF2 序列特性分析 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-44页 |
| ·病毒培养 | 第39页 |
| ·细胞收获毒的PCR 检测 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第40页 |
| ·测序结果 | 第40-41页 |
| ·本地样品PCV 的ORF2 序列同源性及系统进化分析 | 第41-44页 |
| 4 分析与讨论 | 第44-47页 |
| 第四章 猪圆环病毒2 型ORF2 基因片段的原核表达 | 第47-64页 |
| 1 材料 | 第47-50页 |
| ·目的片段 | 第47页 |
| ·载体与菌株 | 第47-48页 |
| ·血清 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·溶液配制 | 第48-50页 |
| ·SDS-PAGE 所用试剂及溶液 | 第48-49页 |
| ·Westemblotting 试剂配置 | 第49页 |
| ·X-gal 溶液(20mg/mL) | 第49页 |
| ·IPTG(20%,m/v) | 第49页 |
| ·纯化试剂配制 | 第49-50页 |
| ·仪器 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-55页 |
| ·ORF2 基因片段的优化合成 | 第50页 |
| ·对合成的pUC-ORF2 目的片段鉴定 | 第50-51页 |
| ·ORF2-pET 32a 重组质粒的构建和鉴定 | 第51-52页 |
| ·ORF2-pET 32a 重组质粒转入BL21 感受态细胞和酶切鉴定 | 第52页 |
| ·诱导表达 | 第52页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第52-53页 |
| ·融合表达产物的可溶性分析 | 第53页 |
| ·重组融合蛋白的纯化及浓度测定 | 第53-54页 |
| ·诱导后细胞液的处理，即细胞裂解液的准备 | 第53页 |
| ·纯化柱的准备 | 第53-54页 |
| ·纯化过程 | 第54页 |
| ·纯化后蛋白浓度测定 | 第54页 |
| ·纯化产物的Western blotting | 第54-55页 |
| ·纯化产物的SDS-PAGE 凝胶制备 | 第54页 |
| ·Western blotting | 第54-55页 |
| 3 结果 | 第55-61页 |
| ·ORF2 基因片段的优化合成 | 第55页 |
| ·合成的pUC-ORF2 目的片段鉴定 | 第55-56页 |
| ·ORF2-pET 32a 载体质粒的构建和鉴定 | 第56-57页 |
| ·ORF2-pET 32a 重组质粒转入BL21 感受态细胞和酶切鉴定 | 第57-58页 |
| ·ORF2-pET 32a 基因的诱导表达和SDS-PAGE 分析 | 第58页 |
| ·融合表达产物的可溶性分析 | 第58-59页 |
| ·重组融合蛋白的纯化及浓度测定 | 第59-60页 |
| ·纯化产物的 Western blotting | 第60-61页 |
| 4 分析与讨论 | 第61-64页 |
| ·对片段的优化合成 | 第61页 |
| ·pET32a 载体的选择 | 第61-62页 |
| ·宿主细胞的选择 | 第62页 |
| ·纯化和Western blotting | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 导师简介 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72-74页 |
