| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 一、前言 | 第8-17页 |
| ·HCMV背景简介 | 第8-12页 |
| ·HCMV病毒简介 | 第8-9页 |
| ·HCMV病毒的结构 | 第9-10页 |
| ·HCMV病毒的复制及基因表达调控 | 第10-11页 |
| ·HCMV感染的发病机制 | 第11-12页 |
| ·HCMV UL49区域相关基因简介 | 第12-13页 |
| ·RACE技术原理 | 第13-16页 |
| ·课题意义 | 第16-17页 |
| 二.技术路线 | 第17-18页 |
| 三.实验器材 | 第18-22页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·实验材料 | 第18-22页 |
| ·菌种、细胞、质粒及病毒 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·常用主要试剂的配方 | 第20-22页 |
| 四.实验方法 | 第22-40页 |
| ·HCMV Towne株的培养及鉴定 | 第22-25页 |
| ·HCMV Towne病毒的培养 | 第22页 |
| ·HCMV Towne病毒DNA的提取 | 第22-23页 |
| ·HCMV Towne株的鉴定 | 第23-25页 |
| ·引物的设计 | 第23页 |
| ·PCR扩增IEA和LA基因 | 第23-25页 |
| ·HCMV总RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·利用5’RACE技术扩增UL49Z基因5’末端全长 | 第26-34页 |
| ·去磷酸化处理 | 第26-27页 |
| ·"去帽子"反应 | 第27页 |
| ·5 ’RACE Adaptor的连接 | 第27-28页 |
| ·反转录反应 | 第28-29页 |
| ·UL49Z基因5’末端的扩增 | 第29-31页 |
| ·引物设计 | 第29页 |
| ·Outer PCR反应(使用TaKaRa LA Taq) | 第29-30页 |
| ·Inner PCR反应(使用TaKaRa LA Taq) | 第30-31页 |
| ·UL49Z基因5’末端的克隆及序列鉴定 | 第31-34页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶回收(采用omega公司E.Z.N.A(?)Gel ExtraetionKit)) | 第31页 |
| ·PCR产物与pMD18-T Vector的连接 | 第31-32页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·重组子的转化 | 第33页 |
| ·重组子的菌落PCR鉴定 | 第33-34页 |
| ·UL49Z基因5’末端克隆质粒的序列鉴定 | 第34页 |
| ·利用3’-RACE技术扩增UL49Z基因3’末端全长 | 第34-37页 |
| ·反转录反应 | 第35页 |
| ·Outer PCR反应(使用TaKaRa LA Taq进行扩增) | 第35-36页 |
| ·Inner PCR反应(使用TaKaRa LA Taq进行扩增) | 第36-37页 |
| ·UL49Z基因3’末端的克隆及序列分析 | 第37页 |
| ·UL49Z基因全长cDNA序列的扩增、克隆和序列分析 | 第37-40页 |
| ·HCMV总RNA的纯化 | 第37-38页 |
| ·HCMV RNA逆转录成cDNA | 第38页 |
| ·RT-PCR扩增UL49Z基因全长cDNA(使用TaKaRa LA Taq进行扩增) | 第38-39页 |
| ·UL49Z基因RT-PCR产物的克隆及侧序 | 第39-40页 |
| 五.结果与分析 | 第40-61页 |
| ·病毒HCMV Towne的培养与鉴定结果 | 第40-41页 |
| ·人包皮成纤维细胞的培养结果 | 第40页 |
| ·HCMV病毒感染人包皮成纤维细胞(HFF)结果 | 第40-41页 |
| ·HCMV Towne病毒的鉴定结果 | 第41页 |
| ·HCMV总RNA的提取结果 | 第41-42页 |
| ·利用5’-RACE技术扩增UL49Z基因5’末端结果 | 第42-46页 |
| ·巢式PCR扩增UL49Z基因的5’末端结果 | 第42-43页 |
| ·UL4Z9基因5’末端的克隆及序列测定 | 第43-46页 |
| ·UL49Z基因5’末端克隆结果鉴定 | 第43-44页 |
| ·UL49Z基因5’末端克隆质粒的测序结果 | 第44-46页 |
| ·利用3’-RACE技术扩增UL49Z基因3’末端 | 第46-49页 |
| ·UL49Z基因3’末端的扩增结果 | 第46-47页 |
| ·UL49Z基因3’末端的克隆及序列测定 | 第47-49页 |
| ·UL49Z基因3’末端克隆结果鉴定 | 第47页 |
| ·UL49Z基因3’末端克隆质粒的测序结果 | 第47-49页 |
| ·UL49Z基因全长的扩增、克隆和序列测定 | 第49-51页 |
| ·UL49Z基因的RT-PCR扩增结果 | 第49-50页 |
| ·UL49Z基因全长RT-PCR产物的克隆及序列测定 | 第50-51页 |
| ·UL49Z基因全长克隆结果鉴定 | 第50-51页 |
| ·UL49Z基因全长克隆质粒的测序结果 | 第51页 |
| ·UL49Z基因全长cDNA序列的生物信息学结果 | 第51-61页 |
| ·UL49Z基因开放阅读编码框分析 | 第51-54页 |
| ·UL49Z编码蛋白质理化性质预测 | 第54-55页 |
| ·UL49Z蛋白质疏水性轮廓分析 | 第55-56页 |
| ·蛋白质功能结构域分析结果 | 第56-58页 |
| ·UL49Z蛋白质序列二级结构预测 | 第58-61页 |
| 六、讨论 | 第61-66页 |
| ·关于UL49Z新基因 | 第61-62页 |
| ·RACE技术 | 第62-63页 |
| ·引物设计 | 第63-66页 |
| 七.结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 附录一 | 第70-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
