| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-22页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸合成酶及其编码基因 | 第10-13页 |
| ·SAM合成酶编码基因 | 第10-11页 |
| ·促进SAM合成进展 | 第11-13页 |
| ·SAM合成酶的分离纯化及其性质研究 | 第13-16页 |
| ·SAM合成酶的分离纯化 | 第13-15页 |
| ·SAM合成酶结构、催化机制及性质研究进展 | 第15-16页 |
| ·毕赤酵母表达系统及其改造 | 第16-21页 |
| ·毕赤酵母重组蛋白表达系统 | 第16-17页 |
| ·毕赤酵母重组蛋白表达系统的改造 | 第17-21页 |
| ·本论文的主要内容及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-35页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·菌种和质粒 | 第22-23页 |
| ·培养基配方 | 第23页 |
| ·实验试剂 | 第23-24页 |
| ·引物 | 第24-25页 |
| ·实验仪器 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-30页 |
| ·分子生物学实验 | 第25-28页 |
| ·菌种的甘油管保种 | 第28页 |
| ·毕赤酵母的摇瓶培养 | 第28-29页 |
| ·蛋白纯化 | 第29-30页 |
| ·分析方法 | 第30-35页 |
| ·SAM含量的测定方法 | 第30-31页 |
| ·胞内SAM合成酶活性测定 | 第31-32页 |
| ·蛋白含量测定 | 第32页 |
| ·SDS-蛋白电泳 | 第32-33页 |
| ·酶学性质的考察 | 第33-34页 |
| ·半乳糖苷酶活性测定 | 第34页 |
| ·GFP荧光强度测定 | 第34-35页 |
| 第三章 SAM合成酶DS16重组表达菌株的构建与表达 | 第35-42页 |
| ·胞内表达载体及重组菌的构建 | 第35-37页 |
| ·带组氨酸标签的ds16基因的获得 | 第35页 |
| ·胞内表达载体的构建 | 第35-37页 |
| ·胞内表达重组菌的构建 | 第37页 |
| ·分泌表达载体及重组菌的构建 | 第37-38页 |
| ·分泌表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·分泌表达重组菌的构建 | 第38页 |
| ·重组菌SAM合成酶的表达 | 第38-41页 |
| ·胞内表达重组菌的诱导表达 | 第39-40页 |
| ·分泌表达重组菌的诱导表达 | 第40页 |
| ·不同表达策略对DS16表达水平的影响 | 第40-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第四章 SAM合成酶DS16的分离纯化及其酶学性质研究 | 第42-50页 |
| ·SAM合成酶DS16的分离纯化 | 第42-45页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第42页 |
| ·阴离子交换层析及其条件优化 | 第42-44页 |
| ·疏水层析 | 第44页 |
| ·DS16纯化结果分析 | 第44-45页 |
| ·DS16的酶学性质研究 | 第45-49页 |
| ·等电点 | 第46页 |
| ·最适pH和最适反应温度 | 第46-47页 |
| ·热稳定性 | 第47页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第47-48页 |
| ·动力学参数 | 第48-49页 |
| ·本章小结 | 第49-50页 |
| 第五章 毕赤酵母分泌系统改造的探索 | 第50-63页 |
| ·信号肽改造策略的设计 | 第50-52页 |
| ·内源性信号肽PIPA00211S的选择 | 第50-52页 |
| ·整合质粒和重组菌的构建 | 第52-58页 |
| ·构建流程 | 第52页 |
| ·LacZ及egfp的获得 | 第52-53页 |
| ·LacZ基因整合质粒及其表达菌的构建 | 第53-56页 |
| ·egfp整合质粒及其表达菌的构建 | 第56-57页 |
| ·ds16NH整合质粒及其表达菌的构建 | 第57-58页 |
| ·信号肽对外源蛋白分泌表达的影响 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| ·本章小结 | 第61-63页 |
| 第六章 结论与展望 | 第63-65页 |
| ·结论 | 第63页 |
| ·展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71页 |