| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-33页 |
| 1.1 放线菌简介 | 第10-16页 |
| 1.1.1 分枝杆菌及其危害 | 第10-11页 |
| 1.1.2 结核病研究模型——耻垢分枝杆菌 | 第11-13页 |
| 1.1.3 链霉菌及其应用 | 第13-14页 |
| 1.1.4 红霉素生产者-红霉糖多孢菌 | 第14-16页 |
| 1.2 放线菌磷源感知及代谢调控的研究现状 | 第16-27页 |
| 1.2.1 磷源感知及代谢调控的分子机制 | 第16-20页 |
| 1.2.2 磷代谢全局调控因子的研究进展 | 第20-27页 |
| 1.3 磷代谢调控对重要生理过程的影响 | 第27-31页 |
| 1.3.1 与其他营养代谢的相互作用 | 第27-29页 |
| 1.3.2 对菌体形态的影响 | 第29-30页 |
| 1.3.3 对次级代谢的影响 | 第30-31页 |
| 1.4 本论文的研究目的及意义 | 第31-33页 |
| 第2章 耻垢分枝杆菌中磷源感知转录调控因子RegX3对甲基柠檬酸循环的调控研究 | 第33-68页 |
| 2.1 引言 | 第33-35页 |
| 2.2 实验原理 | 第35页 |
| 2.3 实验材料 | 第35-40页 |
| 2.3.1 菌株与质粒 | 第35-36页 |
| 2.3.2 试剂与耗材 | 第36-38页 |
| 2.3.3 实验仪器 | 第38页 |
| 2.3.4 培养基及溶液 | 第38-40页 |
| 2.4 实验方法 | 第40-55页 |
| 2.4.1 调控蛋白靶基因预测 | 第40页 |
| 2.4.2 regX3与prpR基因的克隆与表达 | 第40-45页 |
| 2.4.3 凝胶阻滞实验(EMSAs) | 第45-47页 |
| 2.4.4 M.smegmatis regX3敲低和过表达菌株的构建 | 第47-51页 |
| 2.4.5 基因转录分析 | 第51-53页 |
| 2.4.6 甲基柠檬酸合成酶(MCS)的酶活测定动力学结合分析 | 第53页 |
| 2.4.7 Octet实验 | 第53-54页 |
| 2.4.8 细胞侵染实验 | 第54-55页 |
| 2.4.9 细菌形态观察实验 | 第55页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第55-66页 |
| 2.5.1 M.smegmatis RegX3、PrpR及PrpDBC的进化分析 | 第55-57页 |
| 2.5.2 M.smegmatis RegX3直接结合prpR基因调控区 | 第57-58页 |
| 2.5.3 M.smegmatis RegX3通过促进PrpR表达来激活甲基柠檬酸循环 | 第58-59页 |
| 2.5.4 RegX3是M. smegmatis利用丙酸盐所必需的 | 第59-61页 |
| 2.5.5 RegX3响应磷源水平调控丙酸盐代谢 | 第61-62页 |
| 2.5.6 RegX3对prpR的调控受PrpR表达的影响 | 第62-63页 |
| 2.5.7 RegX3促进M.smegmatis在巨噬细胞内的存活 | 第63-64页 |
| 2.5.8 RegX3影响着丙酸盐中M.smegmatis的生长形态 | 第64-65页 |
| 2.5.9 磷源感知调控因子RegX3调控PrpR在M.tuberculosis中保守 | 第65-66页 |
| 2.6 本章小结 | 第66-68页 |
| 第3章 红霉糖多孢菌中磷源感知调控因子PhoP调控的SAM依赖性红霉素合成过程研究 | 第68-89页 |
| 3.1 引言 | 第68-70页 |
| 3.2 实验原理 | 第70页 |
| 3.3 实验材料 | 第70-74页 |
| 3.3.1 质粒和菌株 | 第70-71页 |
| 3.3.2 实验试剂 | 第71-72页 |
| 3.3.3 实验仪器 | 第72-73页 |
| 3.3.4 培养基及溶液 | 第73-74页 |
| 3.4 实验方法 | 第74-79页 |
| 3.4.1 调控蛋白靶基因预测 | 第74页 |
| 3.4.2 glnR与phoP基因的克隆与表达 | 第74-75页 |
| 3.4.3 凝胶阻滞实验(EMSAs) | 第75页 |
| 3.4.4 S.erythraea phoP过表达及glnR敲除、回补、过表达菌株的构建 | 第75-77页 |
| 3.4.5 基因转录分析 | 第77-78页 |
| 3.4.6 HPLC平台测定胞内SAM含量 | 第78页 |
| 3.4.7 HPLC平台测定培养液中红霉素组分A和C含量 | 第78页 |
| 3.4.8 抑菌圈实验评估红霉素效价 | 第78-79页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第79-87页 |
| 3.5.1 S.erythraea SAM合成酶的生物信息学分析 | 第79-80页 |
| 3.5.2 营养调控因子PhoP直接结合SAM合成酶基因(SACE_3900)上游调控区 | 第80-81页 |
| 3.5.3 PhoP激活SAM合成酶编码基因的表达 | 第81-82页 |
| 3.5.4 PhoP与氮代谢全局调控因子GlnR共同调控SAM的合成 | 第82-85页 |
| 3.5.5 PhoP与GlnR共同促进SAM依赖性红霉素合成 | 第85-87页 |
| 3.6 本章小结 | 第87-89页 |
| 第4章 总结与展望 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-108页 |
| 附录 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
