| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第9-22页 |
| 1.1 多梳家族蛋白及Cbx4概述 | 第9-15页 |
| 1.1.1 多梳家族蛋白成员及其功能 | 第9-12页 |
| 1.1.2 Cbx4及肝细胞癌概述 | 第12-15页 |
| 1.2 低氧诱导因子HIF及其SUMO化修饰研究现状 | 第15-19页 |
| 1.2.1 低氧诱导因子HIF概述 | 第15-16页 |
| 1.2.2 SUMO化修饰与HIF-1 | 第16-19页 |
| 1.3 本文的研究内容 | 第19-22页 |
| 2 实验材料和方法 | 第22-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第22-24页 |
| 2.1.2 主要抗体 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-43页 |
| 2.2.1 细胞及培养条件 | 第26-27页 |
| 2.2.2 细胞培养、冻存、复苏 | 第27-28页 |
| 2.2.3 细胞转染 | 第28页 |
| 2.2.4 质粒获得和构建 | 第28-32页 |
| 2.2.5 免疫印迹实验(Western Blot) | 第32-33页 |
| 2.2.6 免疫共沉淀 | 第33-34页 |
| 2.2.7 稳定转染细胞系的构建 | 第34-35页 |
| 2.2.8 GST pull-down实验 | 第35-36页 |
| 2.2.9 荧光报告素酶实验 | 第36-37页 |
| 2.2.10 酶联免疫吸附实验(ELISA) | 第37页 |
| 2.2.11 RNA提取 | 第37-38页 |
| 2.2.12 反转录PCR(RT-PCR) | 第38页 |
| 2.2.13 实时定量PCR(qRT-PCR) | 第38-39页 |
| 2.2.14 体外血管形成实验 | 第39页 |
| 2.2.15 原位移植肝癌模型 | 第39-40页 |
| 2.2.16 裸鼠活体成像 | 第40页 |
| 2.2.17 组织固定,脱水,透明及包埋 | 第40-41页 |
| 2.2.18 免疫组化 | 第41-42页 |
| 2.2.19 H&E染色 | 第42-43页 |
| 3 结果和讨论 | 第43-78页 |
| 3.1 Cbx4 促进低氧条件下VEGF的表达 | 第43-45页 |
| 3.1.1 过表达Cbx4促进低氧条件下VEGF的表达 | 第43页 |
| 3.1.2 敲低Cbx4抑制低氧引起的VEGF的表达上调 | 第43-44页 |
| 3.1.3 讨论 | 第44-45页 |
| 3.2 Cbx4 通过HIF-1增加低氧条件下VEGF的表达 | 第45-47页 |
| 3.3 Cbx4 增强HIF-1的转录活性 | 第47-52页 |
| 3.3.1 Cbx4 可以增强HIF-1α的转录活性 | 第47页 |
| 3.3.2 Cbx4 增强HIF-1α的转录活性需要SIM1和SIM2两个结构域 | 第47-50页 |
| 3.3.3 Cbx4 并不影响HIF-1α的蛋白稳定性 | 第50-51页 |
| 3.3.4 讨论 | 第51-52页 |
| 3.4 SUMOs促进Cbx4 增强HIF-1的转录活性及VEGF的表达 | 第52-55页 |
| 3.4.1 SUMOs促进Cbx4调节的HIF-1的转录活性 | 第52-53页 |
| 3.4.2 SUMOs促进Cbx4介导的VEGF的表达 | 第53-54页 |
| 3.4.3 讨论 | 第54-55页 |
| 3.5 Cbx4与HIF-1α相互作用并使其发生SUMO化修饰 | 第55-62页 |
| 3.5.1 Cbx4与HIF-1α相互作用 | 第55-56页 |
| 3.5.2 Cbx4与HIF-1α相互作用结构域 | 第56-57页 |
| 3.5.3 Cbx4可使HIF-1ɑ发生SUMO化修饰 | 第57-60页 |
| 3.5.4 讨论 | 第60-62页 |
| 3.6 Cbx4 通过SUMO化修饰HIF-1α增强其转录活性并促进VEGF的表达 | 第62-65页 |
| 3.6.1 Cbx4通过SUMO化修饰HIF-1α增强其转录活性 | 第62-63页 |
| 3.6.2 Cbx4通过SUMO化修饰HIF-1α增强VEGF的表达 | 第63-65页 |
| 3.7 Cbx4 通过其SUMO化E3连接酶活性促进体外血管形成 | 第65-67页 |
| 3.8 Cbx4 促进肝癌原位肿瘤的形成依赖其SUMOE3连接酶活性 | 第67-71页 |
| 3.8.1 Cbx4不调控肝癌细胞系MHCC97L的生长及细胞周期 | 第67-68页 |
| 3.8.2 Cbx4在原位移植的肝癌模型中通过其SUMO化E3连接酶活性促进血管生成和肿瘤生长 | 第68-71页 |
| 3.9 筛选靶向Cbx4的SUMO化E3连接酶活性和(或)抑制Cbx4-HIF-1α相互作用位点的化合物 | 第71-78页 |
| 3.9.1 双荧光素酶报告基因检测系统筛选化合物体系的建立 | 第71-74页 |
| 3.9.2 Cbx4与HIF-1α截短体的构建 | 第74-76页 |
| 3.9.3 讨论 | 第76-78页 |
| 4 全文总结 | 第78-81页 |
| 参考文献 | 第81-85页 |
| 致谢 | 第85-88页 |
| 学术论文和科研成果目录 | 第88-89页 |
| 全文主要缩略语中英文对照 | 第89-91页 |
