| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 1 文献综述 | 第11-18页 |
| 1.1 蛋白质重组技术与大肠杆菌表达系统 | 第11页 |
| 1.2 融合标签技术 | 第11-12页 |
| 1.3 酵母小泛素修饰蛋白(SUMO)及其蛋白酶Ulp1的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.3.1 酵母小泛素修饰蛋白(SUMO)的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3.2 Ulp1的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.4 酶的固定化 | 第15-18页 |
| 1.4.1 酶的固定化定义 | 第15页 |
| 1.4.2 传统的酶固定方法 | 第15-16页 |
| 1.4.3 其他特殊的酶固定方法 | 第16-18页 |
| 2 引言 | 第18-20页 |
| 3 材料与方法 | 第20-26页 |
| 3.1 材料 | 第20-21页 |
| 3.1.1 菌株、质粒和基因 | 第20页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第20页 |
| 3.1.3 实验仪器和设备 | 第20-21页 |
| 3.1.4 试剂及缓冲液配置浓度及方法 | 第21页 |
| 3.2 方法 | 第21-26页 |
| 3.2.1 融合蛋白Ulp1、底物表达载体的构建 | 第21-22页 |
| 3.2.2 不同融合蛋白的表达条件 | 第22页 |
| 3.2.3 再生无定形纤维素(RAC)的活化 | 第22页 |
| 3.2.4 两种固定化蛋白酶及融合蛋白底物的纯化 | 第22-24页 |
| 3.2.5 蛋白胞内表达分析 | 第24页 |
| 3.2.6 两种固定化Ulp1的活性、泄漏率及重复使用性分析 | 第24-25页 |
| 3.2.7 固定化Ulp1对原核细胞内蛋白酶的耐受性 | 第25页 |
| 3.2.8 对新鲜、使用后的包涵体进行构象评估 | 第25-26页 |
| 4 结果与分析 | 第26-34页 |
| 4.1 胞内表达不溶性Ulp1蛋白 | 第26-27页 |
| 4.2 不溶性Ulp1包涵体与底物的酶活反应 | 第27-28页 |
| 4.3 定向固定可溶性CBM-Ulp1蛋白 | 第28页 |
| 4.4 两种固定化Ulp1蛋白酶的裂解活性和稳定性 | 第28-30页 |
| 4.5 两种固定化Ulp1蛋白酶的泄漏率和可重复使用性 | 第30-32页 |
| 4.6 两种固定化Ulp1蛋白酶对胰蛋白酶的耐受性 | 第32页 |
| 4.7 新鲜制备、重复使用的GFIL8-Ulp1包涵体的构象评估 | 第32-34页 |
| 5 讨论 | 第34-37页 |
| 5.1 Ulp1的固定化方法研究 | 第34页 |
| 5.2 固定化Ulp1的活性及稳定性研究 | 第34-35页 |
| 5.3 Ulp1活性包涵体构象变化检测 | 第35-37页 |
| 结论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-48页 |
| 作者简介 | 第48页 |
