中文摘要 | 第8-12页 |
ABSTRACT | 第12-15页 |
英文缩略词对照表 | 第16-19页 |
前言 | 第19-21页 |
1 实验材料 | 第21-25页 |
1.1 实验动物 | 第21-22页 |
1.2 实验细胞 | 第22页 |
1.3 药品和试剂 | 第22-25页 |
1.3.1 主要试剂和抗体 | 第22-23页 |
1.3.2 实验仪器 | 第23-24页 |
1.3.3 实验试剂的配制 | 第24-25页 |
2 实验方法 | 第25-38页 |
2.1 动物饲养 | 第25页 |
2.2 AS模型的建立分组及给药 | 第25-26页 |
2.3 标本取材及包埋、切片、染色及图像分析 | 第26-28页 |
2.4 Western blot法检测蛋白表达 | 第28-29页 |
2.5 ELISA检测IL-1β和IL-6的水平 | 第29页 |
2.6 细胞培养 | 第29-30页 |
2.7 CCK8法检测细胞的活性 | 第30-31页 |
2.8 外泌体的提取制备 | 第31-32页 |
2.8.1 去内源性外泌体FBS(Exo-free FBS)的制备 | 第31页 |
2.8.2 超滤浓缩法提取外泌体 | 第31-32页 |
2.8.3 试剂盒法提取外泌体 | 第32页 |
2.9 外泌体的生物学鉴定 | 第32-33页 |
2.9.1 透射电子显微镜观察外泌体形态 | 第32页 |
2.9.2 外泌体的粒径和电位的检测 | 第32-33页 |
2.9.3 Western blot检测外泌体标志蛋白的表达 | 第33页 |
2.10 RP-HLPC测定外泌体中丹皮酚的含量 | 第33页 |
2.11 RT-PCR检测miR-223的含量 | 第33-36页 |
2.12 外泌体摄取实验 | 第36页 |
2.13 THP-1细胞和HUVEC粘附实验 | 第36页 |
2.14 细胞的转染 | 第36-37页 |
2.15 荧光素酶报告基因检测靶基因 | 第37-38页 |
2.16 统计学方法与处理 | 第38页 |
3 结果 | 第38-66页 |
3.1 Pae抑制ApoE~(-/-)小鼠斑块形成以及炎症介质的表达(流程见附录图1) | 第38-43页 |
3.1.1 Pae减少ApoE~(-/-)小鼠主动脉斑块面积 | 第38-39页 |
3.1.2 Pae降低ApoE~(-/-)小鼠炎症介质的释放 | 第39-40页 |
3.1.3 Pae抑制ApoE~(-/-)小鼠主动脉M/MΦ的粘附 | 第40-41页 |
3.1.4 Pae抑制ApoE~(-/-)小鼠主动脉pSTAT3的表达 | 第41-42页 |
3.1.5 Pae升高ApoE~(-/-)小鼠主动脉miR-223的含量以及miR-223和STAT3,p-STAT3表达相关性分析 | 第42-43页 |
3.2 Pae抑制与LPS刺激的THP-1细胞共培养的HUVEC炎症反应(流程见附录图2) | 第43-50页 |
3.2.1 Pae对LPS致THP-1存活率保护作用的时效与量效关系 | 第43-44页 |
3.2.2 Pae升高LPS刺激的THP-1中miR-223的表达 | 第44-45页 |
3.2.3 Pae升高与LPS刺激的THP-1细胞共培养的HUVEC中miR-223的表达 | 第45-47页 |
3.2.4 Pae抑制与LPS刺激的THP-1细胞共培养的HUVEC炎症反应 | 第47-48页 |
3.2.5 Pae抑制THP-1细胞共培养的HUVEC的炎症反应通过调节THP-1细胞来源的外泌体 | 第48-50页 |
3.3 Pae对外泌体的生物学形态影响(流程见附录图3) | 第50-54页 |
3.3.1 透射电子显微镜观察外泌体形态 | 第50页 |
3.3.2 Western blot检测外泌体标志蛋白的表达 | 第50-51页 |
3.3.3 DLS和NTA检测外泌体的粒径和电位 | 第51-54页 |
3.4 Pae通过THP-1细胞来源外泌体缓解HUVEC炎症反应(流程见附录图4) | 第54-60页 |
3.4.1 Pae-exo提高HUVEC的存活率 | 第54-56页 |
3.4.2 Pae-exo升高HUVEC中miR-223的水平 | 第56-58页 |
3.4.3 Pae-exo抑制HUVEC的炎症反应 | 第58-59页 |
3.4.4 Pae-exo抑制HUVEC中pSTAT3蛋白表达 | 第59-60页 |
3.5 Pae通过升高THP-1细胞来源外泌体miR-223抑制HUVEC | 第60-66页 |
3.5.1 双荧光素酶基因报告实验对miR-223靶基因的验证 | 第60-61页 |
3.5.2 转染miR-223mimic和inhibitor的THP-1源性外泌体对HUVEC中miR-223的影响 | 第61-62页 |
3.5.3 转染miR-223mimic和inhibitor的THP-1源性外泌体对HUVEC中STAT3、pSTAT3的影响 | 第62-63页 |
3.5.4 Pae对转染miR-223mimic和inhibitor的THP-1源性外泌体刺激的HUVEC中miR-223的影响 | 第63页 |
3.5.5 Pae对转染miR-223mimic和inhibitor的THP-1源性外泌体刺激的HUVEC中STAT3、pSTAT3的影响 | 第63-64页 |
3.5.6 Pae对转染miR-223mimic和inhibitor的THP-1源性外泌体刺激的HUVEC炎症反应的影响 | 第64-66页 |
4 讨论 | 第66-79页 |
4.1 Pae减少ApoE~(-/-)小鼠主动脉斑块面积 | 第66页 |
4.2 Pae减少ApoE~(-/-)小鼠炎症介质的释放 | 第66-67页 |
4.3 外泌体的提取、鉴定 | 第67-71页 |
4.3.1 外泌体的提取 | 第67-69页 |
4.3.2 外泌体的鉴定 | 第69-71页 |
4.4 Pae-exo降低HUVEC炎症反应 | 第71-73页 |
4.5 Pae-exo抑制HUVEC中STAT3、pSTAT3通路的表达 | 第73-75页 |
4.6 Pae-exo介导的miR-223的传递作用 | 第75-76页 |
4.7 Pae对miR-223的调控作用 | 第76-77页 |
4.8 Pae通过升高THP-1细胞来源外泌体miR-223抑制HUVEC的STAT3通路 | 第77-79页 |
全文总结 | 第79-80页 |
参考文献 | 第80-89页 |
综述 | 第89-107页 |
参考文献 | 第102-107页 |
附录 -技术路线图 | 第107-109页 |
个人简历 | 第109-110页 |
致谢 | 第110页 |