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丹皮酚通过升高单核细胞来源的外泌体miR-223抑制STAT3介导的内皮细胞炎症反应

中文摘要第8-12页
ABSTRACT第12-15页
英文缩略词对照表第16-19页
前言第19-21页
1 实验材料第21-25页
    1.1 实验动物第21-22页
    1.2 实验细胞第22页
    1.3 药品和试剂第22-25页
        1.3.1 主要试剂和抗体第22-23页
        1.3.2 实验仪器第23-24页
        1.3.3 实验试剂的配制第24-25页
2 实验方法第25-38页
    2.1 动物饲养第25页
    2.2 AS模型的建立分组及给药第25-26页
    2.3 标本取材及包埋、切片、染色及图像分析第26-28页
    2.4 Western blot法检测蛋白表达第28-29页
    2.5 ELISA检测IL-1β和IL-6的水平第29页
    2.6 细胞培养第29-30页
    2.7 CCK8法检测细胞的活性第30-31页
    2.8 外泌体的提取制备第31-32页
        2.8.1 去内源性外泌体FBS(Exo-free FBS)的制备第31页
        2.8.2 超滤浓缩法提取外泌体第31-32页
        2.8.3 试剂盒法提取外泌体第32页
    2.9 外泌体的生物学鉴定第32-33页
        2.9.1 透射电子显微镜观察外泌体形态第32页
        2.9.2 外泌体的粒径和电位的检测第32-33页
        2.9.3 Western blot检测外泌体标志蛋白的表达第33页
    2.10 RP-HLPC测定外泌体中丹皮酚的含量第33页
    2.11 RT-PCR检测miR-223的含量第33-36页
    2.12 外泌体摄取实验第36页
    2.13 THP-1细胞和HUVEC粘附实验第36页
    2.14 细胞的转染第36-37页
    2.15 荧光素酶报告基因检测靶基因第37-38页
    2.16 统计学方法与处理第38页
3 结果第38-66页
    3.1 Pae抑制ApoE~(-/-)小鼠斑块形成以及炎症介质的表达(流程见附录图1)第38-43页
        3.1.1 Pae减少ApoE~(-/-)小鼠主动脉斑块面积第38-39页
        3.1.2 Pae降低ApoE~(-/-)小鼠炎症介质的释放第39-40页
        3.1.3 Pae抑制ApoE~(-/-)小鼠主动脉M/MΦ的粘附第40-41页
        3.1.4 Pae抑制ApoE~(-/-)小鼠主动脉pSTAT3的表达第41-42页
        3.1.5 Pae升高ApoE~(-/-)小鼠主动脉miR-223的含量以及miR-223和STAT3,p-STAT3表达相关性分析第42-43页
    3.2 Pae抑制与LPS刺激的THP-1细胞共培养的HUVEC炎症反应(流程见附录图2)第43-50页
        3.2.1 Pae对LPS致THP-1存活率保护作用的时效与量效关系第43-44页
        3.2.2 Pae升高LPS刺激的THP-1中miR-223的表达第44-45页
        3.2.3 Pae升高与LPS刺激的THP-1细胞共培养的HUVEC中miR-223的表达第45-47页
        3.2.4 Pae抑制与LPS刺激的THP-1细胞共培养的HUVEC炎症反应第47-48页
        3.2.5 Pae抑制THP-1细胞共培养的HUVEC的炎症反应通过调节THP-1细胞来源的外泌体第48-50页
    3.3 Pae对外泌体的生物学形态影响(流程见附录图3)第50-54页
        3.3.1 透射电子显微镜观察外泌体形态第50页
        3.3.2 Western blot检测外泌体标志蛋白的表达第50-51页
        3.3.3 DLS和NTA检测外泌体的粒径和电位第51-54页
    3.4 Pae通过THP-1细胞来源外泌体缓解HUVEC炎症反应(流程见附录图4)第54-60页
        3.4.1 Pae-exo提高HUVEC的存活率第54-56页
        3.4.2 Pae-exo升高HUVEC中miR-223的水平第56-58页
        3.4.3 Pae-exo抑制HUVEC的炎症反应第58-59页
        3.4.4 Pae-exo抑制HUVEC中pSTAT3蛋白表达第59-60页
    3.5 Pae通过升高THP-1细胞来源外泌体miR-223抑制HUVEC第60-66页
        3.5.1 双荧光素酶基因报告实验对miR-223靶基因的验证第60-61页
        3.5.2 转染miR-223mimic和inhibitor的THP-1源性外泌体对HUVEC中miR-223的影响第61-62页
        3.5.3 转染miR-223mimic和inhibitor的THP-1源性外泌体对HUVEC中STAT3、pSTAT3的影响第62-63页
        3.5.4 Pae对转染miR-223mimic和inhibitor的THP-1源性外泌体刺激的HUVEC中miR-223的影响第63页
        3.5.5 Pae对转染miR-223mimic和inhibitor的THP-1源性外泌体刺激的HUVEC中STAT3、pSTAT3的影响第63-64页
        3.5.6 Pae对转染miR-223mimic和inhibitor的THP-1源性外泌体刺激的HUVEC炎症反应的影响第64-66页
4 讨论第66-79页
    4.1 Pae减少ApoE~(-/-)小鼠主动脉斑块面积第66页
    4.2 Pae减少ApoE~(-/-)小鼠炎症介质的释放第66-67页
    4.3 外泌体的提取、鉴定第67-71页
        4.3.1 外泌体的提取第67-69页
        4.3.2 外泌体的鉴定第69-71页
    4.4 Pae-exo降低HUVEC炎症反应第71-73页
    4.5 Pae-exo抑制HUVEC中STAT3、pSTAT3通路的表达第73-75页
    4.6 Pae-exo介导的miR-223的传递作用第75-76页
    4.7 Pae对miR-223的调控作用第76-77页
    4.8 Pae通过升高THP-1细胞来源外泌体miR-223抑制HUVEC的STAT3通路第77-79页
全文总结第79-80页
参考文献第80-89页
综述第89-107页
    参考文献第102-107页
附录 -技术路线图第107-109页
个人简历第109-110页
致谢第110页

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